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知音者2

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR出现非特异性扩增,求高手解答

体系:2xmix 12.5ul,引物(Im26-f,Im3r)各0.5ul,ddw10.5,模版200ng,1ul。程序94 5min,94 30s,56 30s,72 60s,72 7min,30个循环。出现非特异性扩增,求高手解答
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
采用touchdownPCR就可以去除非特异性条带了
生物化学与分子生物学
9楼2012-08-27 10:13:37
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查看全部 10 个回答

wcwluwei

禁虫 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

2楼2012-08-25 11:47:03
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-25 20:12:08
楼主,需要把你的PCR具体信息给出才好分析,例如,引物浓度,你的引物是如何设计的,目标片段是多少等等,其次,你的PCR目的是什么,如果是为了做QPCR,非特异带是绝对不允许的,如果只是做MAKRE倒是关系不大,如果是克隆基因或做表达,只克隆目标就可以了,请说明你的意图。
其次,可以提高退火温度,降低镁离子浓度,加入适量DMSO提高特异性。
3楼2012-08-25 15:01:50
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知音者2

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-25 15:01:50
楼主,需要把你的PCR具体信息给出才好分析,例如,引物浓度,你的引物是如何设计的,目标片段是多少等等,其次,你的PCR目的是什么,如果是为了做QPCR,非特异带是绝对不允许的,如果只是做MAKRE倒是关系不大,如果 ...

非常感谢,引物浓度是10um,是参考外文文献设计的,目标片段是1400kb。我要做nested-pcr。
4楼2012-08-25 16:48:41
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