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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR出现非特异性扩增，求高手解答
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知音者2

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR出现非特异性扩增，求高手解答

体系：2xmix 12.5ul,引物（Im26-f,Im3r）各0.5ul，ddw10.5，模版200ng，1ul。程序94 5min，94 30s，56 30s，72 60s，72 7min，30个循环。出现非特异性扩增，求高手解答
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1楼 2012-08-25 10:26:03
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
采用touchdownPCR就可以去除非特异性条带了
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生物化学与分子生物学
9楼2012-08-27 10:13:37
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wcwluwei

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
2楼2012-08-25 11:47:03
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-25 20:12:08
楼主，需要把你的PCR具体信息给出才好分析，例如，引物浓度，你的引物是如何设计的，目标片段是多少等等，其次，你的PCR目的是什么，如果是为了做QPCR，非特异带是绝对不允许的，如果只是做MAKRE倒是关系不大，如果是克隆基因或做表达，只克隆目标就可以了，请说明你的意图。
其次，可以提高退火温度，降低镁离子浓度，加入适量DMSO提高特异性。
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3楼2012-08-25 15:01:50
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知音者2

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chenguestc at 2012-08-25 15:01:50
楼主，需要把你的PCR具体信息给出才好分析，例如，引物浓度，你的引物是如何设计的，目标片段是多少等等，其次，你的PCR目的是什么，如果是为了做QPCR，非特异带是绝对不允许的，如果只是做MAKRE倒是关系不大，如果 ...

非常感谢，引物浓度是10um，是参考外文文献设计的，目标片段是1400kb。我要做nested-pcr。
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4楼2012-08-25 16:48:41
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