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fanwq258

木虫 (正式写手)

[求助] 模版GC含量高,二级结构复杂,PCR扩不出来 已有1人参与

如题,我的两个基因GC含量74%,75%左右,75%的扩出来了,但是74%这个怎么弄也扩不出来,用的TAKARA的primestar HS with GC buffer。 二级结构预测用的RNA structure 。
模版GC含量高,二级结构复杂,PCR扩不出来
图片1.png

[ Last edited by fanwq258 on 2014-3-7 at 10:04 ]
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要么好好活,要么死,拒绝半死不活
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 应助指数+1, 鼓励回帖交流 2014-03-07 13:38:51
可能是引物设计的不是很好,在退火温度条件下预测一些你的目的片段的二级结构,设计引物时尽量避开这些二级结构。另外,我用sangon的高GC的Mix扩增出GC%为78%的片段,如果引物设计没有问题,不妨换一下产品试试
rainwater
2楼2014-03-07 11:27:07
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平凡乌托邦

铁虫 (正式写手)

加DMSO和甘油试试!
理想很丰满,现实很骨感
3楼2014-03-09 17:10:51
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小尾巴亚杰

金虫 (小有名气)

我用PrimerSTAR和他的GCbuffer扩,把退火温度调到60度,你在试试,有时候加一些DMSO,Mg离子,效果也是不错的
4楼2014-03-11 15:51:56
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fanwq258

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小尾巴亚杰 at 2014-03-11 15:51:56
我用PrimerSTAR和他的GCbuffer扩,把退火温度调到60度,你在试试,有时候加一些DMSO,Mg离子,效果也是不错的

你是说三步法吗?
要么好好活,要么死,拒绝半死不活
5楼2014-03-11 22:27:29
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小尾巴亚杰

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by fanwq258 at 2014-03-11 22:27:29
你是说三步法吗?...

是的
6楼2014-03-12 10:34:00
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