24小时热门版块排行榜    

查看: 3267  |  回复: 5

fanwq258

木虫 (正式写手)

[求助] 模版GC含量高,二级结构复杂,PCR扩不出来 已有1人参与

如题,我的两个基因GC含量74%,75%左右,75%的扩出来了,但是74%这个怎么弄也扩不出来,用的TAKARA的primestar HS with GC buffer。 二级结构预测用的RNA structure 。
模版GC含量高,二级结构复杂,PCR扩不出来
图片1.png

[ Last edited by fanwq258 on 2014-3-7 at 10:04 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

要么好好活,要么死,拒绝半死不活
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangyunjing

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 应助指数+1, 鼓励回帖交流 2014-03-07 13:38:51
可能是引物设计的不是很好,在退火温度条件下预测一些你的目的片段的二级结构,设计引物时尽量避开这些二级结构。另外,我用sangon的高GC的Mix扩增出GC%为78%的片段,如果引物设计没有问题,不妨换一下产品试试
rainwater
2楼2014-03-07 11:27:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

平凡乌托邦

铁虫 (正式写手)

加DMSO和甘油试试!
理想很丰满,现实很骨感
3楼2014-03-09 17:10:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小尾巴亚杰

金虫 (小有名气)

我用PrimerSTAR和他的GCbuffer扩,把退火温度调到60度,你在试试,有时候加一些DMSO,Mg离子,效果也是不错的
4楼2014-03-11 15:51:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fanwq258

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小尾巴亚杰 at 2014-03-11 15:51:56
我用PrimerSTAR和他的GCbuffer扩,把退火温度调到60度,你在试试,有时候加一些DMSO,Mg离子,效果也是不错的

你是说三步法吗?
要么好好活,要么死,拒绝半死不活
5楼2014-03-11 22:27:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小尾巴亚杰

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by fanwq258 at 2014-03-11 22:27:29
你是说三步法吗?...

是的
6楼2014-03-12 10:34:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fanwq258 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +16 爱看书的可乐 2026-08-26 18/900 2026-08-28 15:14 by winsaint
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +8 苏东坡二世 2026-08-23 8/400 2026-08-28 14:41 by lkforward
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +4 gdd2018 2026-08-28 9/450 2026-08-28 14:22 by jklily
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +3 bud_bud 2026-08-27 6/300 2026-08-28 11:53 by bud_bud
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+5) +12 晴天加油 2026-08-26 13/650 2026-08-28 11:32 by skyjudy
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +10 Kittylucky 2026-08-27 11/550 2026-08-28 10:45 by Kittylucky
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
请填处理意见