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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】我的PCR引物很好，但加酶切位点后扩不出来，不知道什么原因？
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475502411

铜虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】我的PCR引物很好，但加酶切位点后扩不出来，不知道什么原因？

我的PCR引物很好，但加酶切位点后扩不出来，不知道什么原因？请高手指点！！！谢谢
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1楼 2011-03-10 23:04:08
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★ ★ ★
475502411(金币+1):谢谢参与
最爱花诗雨(金币+2): 鼓励交流~ 2011-03-11 09:47:05
引用回帖:
Originally posted by 475502411 at 2011-03-10 23:04:08:
我的PCR引物很好，但加酶切位点后扩不出来，不知道什么原因？请高手指点！！！谢谢

看看你加酶切位点之后有没有和3‘端配对儿，形成发卡？

PCR之后有没有引物二聚体？
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2楼2011-03-10 23:11:10
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anjinghebust

至尊木虫 (知名作家)
★
475502411(金币+1):谢谢参与
祝福难题早日解决！
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4楼2011-03-10 23:42:38
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phoenix211

金虫 (小有名气)
★
475502411(金币+1):谢谢参与
可以优化下扩增的条件。
做个温度梯度。
调整下体系什么的。
加点BSA或DMSO什么的有时候会有效果。
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5楼2011-03-11 01:33:10
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)
★
475502411(金币+1):谢谢参与
引物设计问题
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6楼2011-03-11 08:07:59
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
★
475502411(金币+1):谢谢参与
加了酶切位点后就不是你那个 很好的引物了。。。
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7楼2011-03-11 09:01:55
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yeruoshui

银虫 (正式写手)
★
475502411(金币+1):谢谢参与
我的也是，P出来的都是二聚体
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9楼2011-03-11 09:26:41
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匿名

用户注销 (小有名气)
★
475502411(金币+1):谢谢参与
本帖仅楼主可见
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11楼2011-03-11 09:36:37
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lordring

金虫 (著名写手)
★
475502411(金币+1):谢谢参与
不懂，帮顶，祝福楼主早日解决问题。
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12楼2011-03-11 09:42:59
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天使托

专家顾问 (职业作家)
★
475502411(金币+1):谢谢参与
最好是设计好你的引物之后，加上酶切位点和保护碱基再用软件看看引物可用否？
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13楼2011-03-11 09:54:44
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过氧化氢

铁虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
475502411(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+3): 很活跃，鼓励 2011-03-24 16:35:07
可能形成二聚体了
赞一下(2人) 回复此楼
14楼2011-03-24 14:34:28
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sxq大嘴

铁虫 (初入文坛)
★ ★
475502411(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+1): 鼓励交流 2011-03-28 11:41:53
你把加好酶切位点的引物，用软件分析一下，引物之间的及引物与序列之间的
赞一下(2人) 回复此楼
15楼2011-03-28 11:15:19
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csdyg

木虫 (正式写手)
★
475502411(金币+1):谢谢参与
估计酶切位点与3‘端形成发卡结构
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16楼2011-03-28 16:32:06
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麻花13

新虫 (小有名气)
★
475502411(金币+1): 谢谢参与
建议在使用引物设计软件使，把酶切位点及保护碱基序列加到原来模板的末端，然后再设计
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17楼2012-04-07 07:44:26
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abczhang3楼
2011-03-10 23:18   回复  
475502411(金币+1):谢谢参与
huashixin8楼
2011-03-11 09:14   回复  
475502411(金币+1):谢谢参与
顶一下
jiangxue8210楼
2011-03-11 09:33   回复  
475502411(金币+1):谢谢参与
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