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475502411

铜虫 (著名写手)


[交流] 【求助/交流】我的PCR引物很好,但加酶切位点后扩不出来,不知道什么原因?

我的PCR引物很好,但加酶切位点后扩不出来,不知道什么原因?请高手指点!!!谢谢
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★ ★ ★
475502411(金币+1):谢谢参与
最爱花诗雨(金币+2): 鼓励交流~ 2011-03-11 09:47:05
引用回帖:
Originally posted by 475502411 at 2011-03-10 23:04:08:
我的PCR引物很好,但加酶切位点后扩不出来,不知道什么原因?请高手指点!!!谢谢

看看你加酶切位点之后有没有和3‘端配对儿,形成发卡?

PCR之后有没有引物二聚体?
2楼2011-03-10 23:11:10
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anjinghebust

至尊木虫 (知名作家)



475502411(金币+1):谢谢参与
祝福难题早日解决!
4楼2011-03-10 23:42:38
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phoenix211

金虫 (小有名气)



475502411(金币+1):谢谢参与
可以优化下扩增的条件。
做个温度梯度。
调整下体系什么的。
加点BSA或DMSO什么的有时候会有效果。
5楼2011-03-11 01:33:10
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)



475502411(金币+1):谢谢参与
引物设计问题
6楼2011-03-11 08:07:59
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)



475502411(金币+1):谢谢参与
加了酶切位点后就不是你那个 很好的引物了。。。
7楼2011-03-11 09:01:55
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yeruoshui

银虫 (正式写手)



475502411(金币+1):谢谢参与
我的也是,P出来的都是二聚体
9楼2011-03-11 09:26:41
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匿名

用户注销 (小有名气)



475502411(金币+1):谢谢参与
本帖仅楼主可见
11楼2011-03-11 09:36:37
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lordring

金虫 (著名写手)



475502411(金币+1):谢谢参与
不懂,帮顶,祝福楼主早日解决问题。
12楼2011-03-11 09:42:59
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475502411(金币+1):谢谢参与
最好是设计好你的引物之后,加上酶切位点和保护碱基再用软件看看引物可用否?
13楼2011-03-11 09:54:44
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过氧化氢

铁虫 (初入文坛)


★ ★ ★ ★
475502411(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+3): 很活跃,鼓励 2011-03-24 16:35:07
可能形成二聚体了
14楼2011-03-24 14:34:28
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sxq大嘴

铁虫 (初入文坛)


★ ★
475502411(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+1): 鼓励交流 2011-03-28 11:41:53
你把加好酶切位点的引物,用软件分析一下,引物之间的及引物与序列之间的
15楼2011-03-28 11:15:19
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csdyg

木虫 (正式写手)



475502411(金币+1):谢谢参与
估计酶切位点与3‘端形成发卡结构
16楼2011-03-28 16:32:06
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麻花13

新虫 (小有名气)



475502411(金币+1): 谢谢参与
建议在使用引物设计软件使,把酶切位点及保护碱基序列加到原来模板的末端,然后再设计
17楼2012-04-07 07:44:26
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简单回复
abczhang3楼
2011-03-10 23:18   回复  
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huashixin8楼
2011-03-11 09:14   回复  
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顶一下
jiangxue8210楼
2011-03-11 09:33   回复  
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