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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】我的PCR引物很好，但加酶切位点后扩不出来，不知道什么原因？
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475502411

铜虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】我的PCR引物很好，但加酶切位点后扩不出来，不知道什么原因？

我的PCR引物很好，但加酶切位点后扩不出来，不知道什么原因？请高手指点！！！谢谢
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1楼 2011-03-10 23:04:08
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麻花13

新虫 (小有名气)
★
475502411(金币+1): 谢谢参与
建议在使用引物设计软件使，把酶切位点及保护碱基序列加到原来模板的末端，然后再设计
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17楼2012-04-07 07:44:26
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★ ★ ★
475502411(金币+1):谢谢参与
最爱花诗雨(金币+2): 鼓励交流~ 2011-03-11 09:47:05
引用回帖:
Originally posted by 475502411 at 2011-03-10 23:04:08:
我的PCR引物很好，但加酶切位点后扩不出来，不知道什么原因？请高手指点！！！谢谢

看看你加酶切位点之后有没有和3‘端配对儿，形成发卡？

PCR之后有没有引物二聚体？
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2楼2011-03-10 23:11:10
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anjinghebust

至尊木虫 (知名作家)
★
475502411(金币+1):谢谢参与
祝福难题早日解决！
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4楼2011-03-10 23:42:38
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phoenix211

金虫 (小有名气)
★
475502411(金币+1):谢谢参与
可以优化下扩增的条件。
做个温度梯度。
调整下体系什么的。
加点BSA或DMSO什么的有时候会有效果。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-03-11 01:33:10
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