应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR之后的产物与设计引物时产物的大小不符？
81/1返回列表
查看: 2252  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

dongfangzz

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR之后的产物与设计引物时产物的大小不符？ 已有5人参与

我要做实时荧光定量PCR，提取的RNA逆转录之后，以cDNA为模板PCR（引物是以mRNA序列设计的）。 PCR之后的产物跑电泳时与设计引物时产物的大小不符。设计引物时产物应为170bp, 而实际产物为200多个bp。
这是怎么回事？
marker为DL1000DNA，共7个带（100、200、300、400、500、700、1000）


连接看不到，再来一个。
http://g.zhubajie.com/urllink.php?id=98985479lxqhk563rrgo7vt

不知是不是和RNA降解有关系?
先谢谢大家了!

[ Last edited by dongfangzz on 2010-9-14 at 23:44 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-09-11 11:44:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

won7

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
设计引物时预期的长度应该包括引物的部分，你说的170bp是否包括了引物？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-09-11 16:50:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongfangzz

银虫 (小有名气)
我不知道呀，公司用primer3.0给设计的。设计后直接把文本文档给发过来了，让我比对。里面信息挺全的,。有一项说product size: 170.
部分原文件：
ADDITIONAL OLIGOS
                                start  len      tm     gc%   any    3' seq
2 LEFT PRIMER         184   20   60.11   55.00  2.00  1.00 gaccctgccttaccaactca
   RIGHT PRIMER       353   20   61.55   60.00  5.00  0.00 cactgtggagacgcccatac
   PRODUCT SIZE: 170, PAIR ANY COMPL: 3.00, PAIR 3' COMPL: 0.00
赞一下 回复此楼
3楼2010-09-11 17:02:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

won7

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看样子，预期是应该170bp，你换个公司的MARKER再跑电泳看看，是不是不同公司的MARKER的错误。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-09-11 19:39:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bigboy123

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
一切都是有可能的，很多人都跑不出条带，荧光PCR依旧很棒。不能太拘泥这个。跟模板有关系，很有可能你遇到的是个缺失的那个，可以测序。
赞一下(1人) 回复此楼
供应PCR增量剂
5楼2010-09-12 09:55:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王家大成

木虫 (正式写手)

囧囧小虫
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有时候会大会小，没有关系
赞一下(1人) 回复此楼
一念起，万水千山；一念灭，沧海桑田！
6楼2010-09-12 10:27:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongfangzz

银虫 (小有名气)
我不知道这样的结果能不能用.
我着方面了解的少．我推测原因至少有２个:
1. 引物的问题.我当时合成了几个基因的引物,公司包装时把引物给装错了管子;
2. marker的问题．
肯定还有其他可能．

不知大家有没有个系统的解释呀?
谢谢！
赞一下 回复此楼
7楼2010-09-12 15:24:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangjie86

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
楼主，你做的荧光定量PCr是用探针还是染料的，你的引物都是公司给设计的吗？我也要做所以想交流一下了。
赞一下(1人) 回复此楼
莫回头看背后的身影。
8楼2010-09-13 14:09:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dongfangzz 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 11/550 2026-08-04 14:48 by jzdxtiUmJ6PL
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +6 Tide man 2026-08-04 9/450 2026-08-04 14:22 by biomichael
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 Ocx3OKOzGU4q 2026-08-04 6/300 2026-08-04 13:28 by jzdxtiUmJ6PL
[找工作] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 Ocx3OKOzGU4q 2026-08-03 7/350 2026-08-04 13:22 by jzdxtiUmJ6PL
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 Ocx3OKOzGU4q 2026-08-03 8/400 2026-08-04 13:15 by jzdxtiUmJ6PL
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 11/550 2026-08-04 12:58 by jzdxtiUmJ6PL
[基金申请] 娱乐 +4 Tide man 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:51 by wgch518
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 Ocx3OKOzGU4q 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:26 by MWRYsWbJw4DE
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 9/450 2026-08-04 07:37 by k7OM8YghWbkC
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 6/300 2026-08-04 06:10 by k7OM8YghWbkC
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 6/300 2026-08-04 04:47 by k7OM8YghWbkC
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 7/350 2026-08-04 04:46 by k7OM8YghWbkC
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 8/400 2026-08-04 03:21 by k7OM8YghWbkC
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
[高分子] UV压敏胶开发 +3 ichall 2026-07-30 5/250 2026-08-03 14:40 by Sunrisepay
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +16 布布和一二 2026-07-30 22/1100 2026-08-03 09:20 by gy116024
[基金申请] 微信指数没变化，科研之友没阅读 +15 wangze12014 2026-07-28 19/950 2026-08-02 20:05 by 蔡棒棒菂
[考博] 2027年申博 50+3 射雕英雄胜 2026-07-30 3/150 2026-08-02 09:36 by lfy8008
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液，是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭