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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR
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xiamr

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR

我所用的pcr体系是50 的，文献上说模板加5 但我的DNA浓度达不到，是否能加到10 ，我试过一次这样能p出来东西。但会不会对体系有影响，或多下游实验有影响？急用！！！
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1楼 2010-09-08 19:04:52
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hulqi

金虫 (正式写手)
这个……一般我PCR25的体系，模板只加1啊
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2楼2010-09-08 19:10:36
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cheo163

金虫 (小有名气)
★
amisking(金币+1):鼓励交流！ 2010-09-08 19:58:09
模版多了也不见得你的dna浓度会上来啊~~
要不要换哈条件，小体系p然后合起来纯化
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3楼2010-09-08 19:49:32
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
可以没有问题 50ul体系没有水么 把水少加一点就可以了
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4楼2010-09-08 19:54:27
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
楼上正解，全加模板，不加水，只要终体系是50，都是没有问题的，谁让你模板浓度太低呢
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5楼2010-09-08 21:28:00
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jasco

木虫 (正式写手)
都p出东西了就没什么好纠结的啦
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6楼2010-09-09 08:51:00
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diaoyuhua

金虫 (小有名气)
模板太多了，一般就加1-2微升，试试
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7楼2010-09-09 11:15:53
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
请不要用体积来定义PCR体系
极限状态下，1个拷贝的模板都可以检测出来
克隆的话要求稍高一些
总之是要配合你的下游实验来确定PCR体系
加多少微升什么的，如果不确定浓度，光说体积毫无意义
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8楼2010-09-09 12:54:59
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biotech113

铜虫 (初入文坛)
模版确实太多了，一般0.5-1ul足够了(只要保证质粒成功提取出来或久置的质粒未降解)！
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不抛弃，不放弃！
9楼2010-09-09 12:56:13
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j2

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-09-09 12:54:59:
请不要用体积来定义PCR体系
极限状态下，1个拷贝的模板都可以检测出来
克隆的话要求稍高一些
总之是要配合你的下游实验来确定PCR体系
加多少微升什么的，如果不确定浓度，光说体积毫无意义

很强的说~~~
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
10楼2010-09-09 13:36:12
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