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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR求助
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ydniu

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR求助 已有7人参与

想调一个基因出来，设计了简并引物扩增保守区，引物回来先以ＤＮＡ为模板扩增摸条件，从４５度到６５度做了梯度，不出条带。怎么办呀？
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1楼 2010-06-28 14:45:22
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glidingwater

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
PCR出问题，原因众多，可详细说出您的程序条件！
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如果社会的黑暗侵蚀了学府，我该往何处？
2楼2010-06-29 09:19:19
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xiaoru2010

★ ★ ★
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scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-08-30 21:32:38
引用回帖:
Originally posted by ydniu at 2010-06-28 14:45:22:
想调一个基因出来，设计了简并引物扩增保守区，引物回来先以ＤＮＡ为模板扩增摸条件，从４５度到６５度做了梯度，不出条带。怎么办呀？

有弥散带不？温度可降至40度，其余体系能摸的就多了，无法确定，模板浓度低的话可用产物再次PCR试试，兼并引物本来就很难扩
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3楼2010-06-29 09:35:36
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琴瑟不鸣

铁虫 (小有名气)
★ ★
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scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-08-30 21:32:43
先看你的模板是不是好的。。。然后看看在65到70之间试一下啊，，，因为之前见过好几对引物的退火在65之上啊
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老虎
4楼2010-06-29 09:39:07
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dingnan8822

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
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scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-08-30 21:32:48
兼并引物本身就不好做，同意楼上说的降低温度~
你用的是什么的PCR仪？有时候梯度设定也有影响的，你查过具体每排的温度么？
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5楼2010-08-30 21:09:48
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danny0426

新虫 (初入文坛)
★
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可以考虑一下二次PCR
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6楼2010-08-30 22:26:51
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sqhnsd

金虫 (正式写手)
★
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基因组质量怎么样？PCR体系质量怎么样？如果可以，其他条件也摸索过了，考虑换引物。
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7楼2010-08-31 00:33:50
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

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优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
模板和引物是关键

pcr体系也可以优化
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8楼2010-08-31 08:15:10
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