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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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ydniu

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR求助 已有7人参与

想调一个基因出来,设计了简并引物扩增保守区,引物回来先以DNA为模板扩增摸条件,从45度到65度做了梯度,不出条带。怎么办呀?
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glidingwater

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
PCR出问题,原因众多,可详细说出您的程序条件!
如果社会的黑暗侵蚀了学府,我该往何处?
2楼2010-06-29 09:19:19
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xiaoru2010

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+2):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-08-30 21:32:38
引用回帖:
Originally posted by ydniu at 2010-06-28 14:45:22:
想调一个基因出来,设计了简并引物扩增保守区,引物回来先以DNA为模板扩增摸条件,从45度到65度做了梯度,不出条带。怎么办呀?

有弥散带不?温度可降至40度,其余体系能摸的就多了,无法确定,模板浓度低的话可用产物再次PCR试试,兼并引物本来就很难扩
3楼2010-06-29 09:35:36
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琴瑟不鸣

铁虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-08-30 21:32:43
先看你的模板是不是好的。。。然后看看在65到70之间试一下啊,,,因为之前见过好几对引物的退火在65之上啊
老虎
4楼2010-06-29 09:39:07
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dingnan8822

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-08-30 21:32:48
兼并引物本身就不好做,同意楼上说的降低温度~
你用的是什么的PCR仪?有时候梯度设定也有影响的,你查过具体每排的温度么?
5楼2010-08-30 21:09:48
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danny0426

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可以考虑一下二次PCR
6楼2010-08-30 22:26:51
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sqhnsd

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
基因组质量怎么样?PCR体系质量怎么样?如果可以,其他条件也摸索过了,考虑换引物。
7楼2010-08-31 00:33:50
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
模板和引物是关键

pcr体系也可以优化
8楼2010-08-31 08:15:10
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