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passingby

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[交流] SSR-PCR求助已有16人参与

本人开始做SSR标记不久，但总是做不出让人满意的结果来，不是PCR出了问题，就是跑胶出问题，版里谁做过SSR标记的给我支个招，看看我做的聚丙烯酰胺凝胶电泳问题出在哪里，给点参考建议，我下面该如何优化是好

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1楼 2011-08-14 22:38:12

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liugs

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2楼2011-08-15 08:21:30

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marker61613

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在倒胶过程中有气泡没有及时赶跑；样品量浓度似乎不一，导致最后银染完后有些条带看不清，或许是压根扩不出条带，2者中的哪一个原因，从图中不能客观得出。

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3楼2011-08-15 13:33:29

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ezrazh

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看图片还可以，最好是说出具体的问题才好。好多问题在你实验技能熟练以后就没有了。

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4楼2011-08-15 16:22:52

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虫虫博士

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西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-08-16 11:39:25

应该是你的PCR体系的问题，或者加样顺序，可以试试换套试剂,包括酶，dNTP，引物

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5楼2011-08-16 10:11:18

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冬天小和尚

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我是新手来学习的

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6楼2011-08-16 14:24:04

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passingby

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2楼: Originally posted by liugs at 2011-08-15 08:21:30:
首先不知道你的问题出在哪里？

能否把你的操作过程给我说说看，我想参考一下，还有那个APS和TEMED你们一般加多少？

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7楼2011-08-18 19:14:03

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3楼: Originally posted by marker61613 at 2011-08-15 13:33:29:
在倒胶过程中有气泡没有及时赶跑；样品量浓度似乎不一，导致最后银染完后有些条带看不清，或许是压根扩不出条带，2者中的哪一个原因，从图中不能客观得出。

能否把你的操作过程给我说说看，我想参考一下，还有那个APS和TEMED你们一般加多少？

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8楼2011-08-18 19:16:38

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4楼: Originally posted by ezrazh at 2011-08-15 16:22:52:
看图片还可以，最好是说出具体的问题才好。好多问题在你实验技能熟练以后就没有了。

因为我做的是SSR，我觉得自己的问题就是PCR跑出来的杂带太多，主带不明显，又不知道该如何是好，之前优化好的PCR现在跑为什么会有这么多杂带呢

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9楼2011-08-18 19:18:47

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5楼: Originally posted by 虫虫博士 at 2011-08-16 10:11:18:
应该是你的PCR体系的问题，或者加样顺序，可以试试换套试剂,包括酶，dNTP，引物

我之前优化过PCR，没有这么多杂带，不知道怎么现在又出现过这么多杂带，你说DNA会不会被污染掉了呢？污染之后会不会出现杂带增多的情况，还有，我是不是要重新优化啊？

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10楼2011-08-18 19:21:28

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