应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR 总是没P出来
221/3返回列表123下一页
查看: 2103  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yangjunzju

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR 总是没P出来 已有17人参与

各位虫友，我最近在做PCR，但是我总是没P出来，我的引物有点长，有75个bp，这个东西有影响吗？是不是应该在退火温度和退火时间上要注意一些啊？如果是的话应该如何确定退火温度和时间呢？还请高手指点。。。不胜感激。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-07-02 17:02:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvtd

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1):good！ 2010-07-02 18:23:32
yangjunzju(金币+1): 2010-07-03 12:23:53
引物太长或太短都有影响。你75个bp，你的延伸温度要多高？不适合酶反应。一般选择15-30个bp，建议你重新设计引物试试。
赞一下(2人) 回复此楼
tobeornottobe,thisisaquestion!
2楼2010-07-02 17:08:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangjunzju

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lvtd at 2010-07-02 17:08:13:
引物太长或太短都有影响。你75个bp，你的延伸温度要多高？不适合酶反应。一般选择15-30个bp，建议你重新设计引物试试。

我的延伸温度是72度，引物不能缩短的情况下有什么办法可以使它尽量P出来吗
赞一下 回复此楼
3楼2010-07-02 17:30:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lixg

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
yangjunzju(金币+1): 2010-07-03 12:24:04
建议试试两步法PCR
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-07-02 17:56:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zsxnd

铁杆木虫 (著名写手)
★
amisking(金币+1):欢迎交流！ 2010-07-02 18:23:41
yangjunzju(金币+1): 2010-07-03 12:24:09
引物确实长，但是退火温度设定为60左右，然后增加循环数，先低温P几圈，后60多，多批几圈，或者加大点Mg的浓度！
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-07-02 18:09:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ydgua

捐助贵宾 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
yangjunzju(金币+1): 2010-07-03 12:24:13
你的目的片段的模板是什么？如果是质粒就应该好做，但如果是cDNA，再加引物这么长，可能会不好做。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-07-02 22:30:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ydgua

捐助贵宾 (小有名气)
yangjunzju(金币+1): 2010-07-03 12:24:18
退火问题你可以根据直接与目的基因配对的那部分序列来推算
赞一下 回复此楼
7楼2010-07-02 22:31:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-07-03 06:24:12
yangjunzju(金币+1): 2010-07-03 12:24:25
不管是用软件还是手工设计的引物都不会像lz说的这样长。估计lz的75bp引物其有效引物即与模板配对的部分应该也是15~30bp左右，其余的部分应该在5‘段，作为一段翘起的尾巴。不知是否正确？
赞一下(2人) 回复此楼
我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
8楼2010-07-02 23:00:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangjunzju

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zhaohq1209 at 2010-07-02 23:00:04:
不管是用软件还是手工设计的引物都不会像lz说的这样长。估计lz的75bp引物其有效引物即与模板配对的部分应该也是15~30bp左右，其余的部分应该在5‘段，作为一段翘起的尾巴。不知是否正确？

呵呵，你果然犀利，对的。。。尾巴长有50bp，有效长度为25。。。那么这个退火温度应该怎么确定呢？还请指点，非常感谢。
赞一下 回复此楼
9楼2010-07-03 12:22:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xzx135

铁杆木虫 (正式写手)
一条引物75个bp?太大了吧，这样你的退火温度会很高的。重新设计一下引物，或者分段pcr
赞一下 回复此楼
10楼2010-07-03 12:33:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yangjunzju 的主题更新
221/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 317求调剂 +10 申子申申 2026-03-19 16/800 2026-03-22 17:03 by ColorlessPI
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 298求调剂一志愿211 +3 上岸6666@ 2026-03-20 3/150 2026-03-22 15:50 by ColorlessPI
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +10 枫桥ZL 2026-03-18 12/600 2026-03-21 22:02 by peike
[考研] 材料与化工（0856）304求 B区 调剂 +3 邱gl 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:47 by lature00
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业（081702）315分求调剂 +12 yangfz 2026-03-17 12/600 2026-03-21 03:30 by JourneyLucky
[考研] 085700资源与环境308求调剂 +12 墨墨漠 2026-03-18 13/650 2026-03-21 01:42 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:46 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大，求调剂 +5 材化逐梦人 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:26 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 3/150 2026-03-20 23:24 by JourneyLucky
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-03-19 11/550 2026-03-20 21:30 by laoshidan
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +10 慕寒mio 2026-03-16 10/500 2026-03-19 15:26 by 丁丁*
[考研] 286求调剂 +6 lemonzzn 2026-03-16 10/500 2026-03-19 14:31 by lemonzzn
[考研] 一志愿苏州大学材料工程（085601）专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨； 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭