应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR 总是没P出来
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
221/3返回列表123下一页
查看: 2121  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yangjunzju

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR 总是没P出来 已有17人参与

各位虫友，我最近在做PCR，但是我总是没P出来，我的引物有点长，有75个bp，这个东西有影响吗？是不是应该在退火温度和退火时间上要注意一些啊？如果是的话应该如何确定退火温度和时间呢？还请高手指点。。。不胜感激。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-07-02 17:02:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvtd

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1):good！ 2010-07-02 18:23:32
yangjunzju(金币+1): 2010-07-03 12:23:53
引物太长或太短都有影响。你75个bp，你的延伸温度要多高？不适合酶反应。一般选择15-30个bp，建议你重新设计引物试试。
赞一下(2人) 回复此楼
tobeornottobe,thisisaquestion!
2楼2010-07-02 17:08:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangjunzju

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lvtd at 2010-07-02 17:08:13:
引物太长或太短都有影响。你75个bp，你的延伸温度要多高？不适合酶反应。一般选择15-30个bp，建议你重新设计引物试试。

我的延伸温度是72度，引物不能缩短的情况下有什么办法可以使它尽量P出来吗
赞一下 回复此楼
3楼2010-07-02 17:30:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lixg

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
yangjunzju(金币+1): 2010-07-03 12:24:04
建议试试两步法PCR
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-07-02 17:56:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zsxnd

铁杆木虫 (著名写手)
★
amisking(金币+1):欢迎交流！ 2010-07-02 18:23:41
yangjunzju(金币+1): 2010-07-03 12:24:09
引物确实长，但是退火温度设定为60左右，然后增加循环数，先低温P几圈，后60多，多批几圈，或者加大点Mg的浓度！
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-07-02 18:09:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ydgua

捐助贵宾 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
yangjunzju(金币+1): 2010-07-03 12:24:13
你的目的片段的模板是什么？如果是质粒就应该好做，但如果是cDNA，再加引物这么长，可能会不好做。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-07-02 22:30:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ydgua

捐助贵宾 (小有名气)
yangjunzju(金币+1): 2010-07-03 12:24:18
退火问题你可以根据直接与目的基因配对的那部分序列来推算
赞一下 回复此楼
7楼2010-07-02 22:31:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-07-03 06:24:12
yangjunzju(金币+1): 2010-07-03 12:24:25
不管是用软件还是手工设计的引物都不会像lz说的这样长。估计lz的75bp引物其有效引物即与模板配对的部分应该也是15~30bp左右，其余的部分应该在5‘段，作为一段翘起的尾巴。不知是否正确？
赞一下(2人) 回复此楼
我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
8楼2010-07-02 23:00:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangjunzju

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zhaohq1209 at 2010-07-02 23:00:04:
不管是用软件还是手工设计的引物都不会像lz说的这样长。估计lz的75bp引物其有效引物即与模板配对的部分应该也是15~30bp左右，其余的部分应该在5‘段，作为一段翘起的尾巴。不知是否正确？

呵呵，你果然犀利，对的。。。尾巴长有50bp，有效长度为25。。。那么这个退火温度应该怎么确定呢？还请指点，非常感谢。
赞一下 回复此楼
9楼2010-07-03 12:22:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xzx135

铁杆木虫 (正式写手)
一条引物75个bp?太大了吧，这样你的退火温度会很高的。重新设计一下引物，或者分段pcr
赞一下 回复此楼
10楼2010-07-03 12:33:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yangjunzju 的主题更新
221/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 复试调剂，一志愿南农083200食品科学与工程 +4 XQTJZ 2026-03-26 4/200 2026-03-27 01:23 by dgnhs
[考研] 351求调剂 +4 麦克阿磊 2026-03-24 4/200 2026-03-27 00:32 by wxiongid
[考研] 349求调剂 +5 杰斯塔里斯 2026-03-21 5/250 2026-03-27 00:31 by wxiongid
[考研] 材料学硕333求调剂 +7 北道巷 2026-03-24 7/350 2026-03-27 00:30 by wxiongid
[考研] 286求调剂 +5 PolarBear11 2026-03-26 5/250 2026-03-26 23:59 by 运气yunqi
[考研] 333求调剂 +6 wfh030413@ 2026-03-23 6/300 2026-03-26 22:45 by 学员8dgXkO
[考研] 294分080500材料科学与工程求调剂 +4 柳溪边 2026-03-26 4/200 2026-03-26 21:14 by XPU李庆
[考研] 291求调剂 +9 hhhhxn.. 2026-03-23 9/450 2026-03-26 18:59 by 不吃魚的貓
[考研] 085601求调剂总分293英一数二 +4 钢铁大炮 2026-03-24 4/200 2026-03-26 16:28 by dick_runner
[考研] 材料科学与工程 317求调剂 +4 JKSOIID 2026-03-26 4/200 2026-03-26 15:58 by 不吃魚的貓
[考研] 299求调剂 +4 15188958825 2026-03-25 4/200 2026-03-25 22:56 by 418490947
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] 材料调剂 +3 iwinso 2026-03-23 3/150 2026-03-25 11:29 by greychen00
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
[考研] 一志愿国科过程所081700，274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 293求调剂 +3 涛涛Wjt 2026-03-22 5/250 2026-03-22 22:21 by jiangpengfei
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 0805材料320求调剂 +3 深海物语 2026-03-20 3/150 2026-03-21 15:46 by 无际的草原
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭