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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教：菌液pcr带总是很弱，为什么？
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billy8580

新虫 (初入文坛)

[交流] 请教：菌液pcr带总是很弱，为什么？ 已有3人参与

各位战友们，
     我p一个基因，回收连接转化，挑菌摇菌，做菌液pcr鉴定，不知道为什么，每次菌液pcr的带很弱很弱，不仔细看，都看不出来，我就选了一管菌液测序，测出的结果是正确的，是我想要的东西。这整个流程已经重复四次了，每次都是这样，不知为什么？菌液摇的也很浓，pcr循环数都在30以上，我p其他片段时，从来没有这种现象。请问这是什么情况？
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1楼 2011-07-10 22:47:19
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雨中的雕塑

银虫 (小有名气)
1949stone: 手机回复 鼓励 2011-07-11 10:14:16
胶浓度有关。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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我愿天下人：人人得以智慧之光，去开启生命之真谛
2楼2011-07-11 07:48:16
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
1949stone(EPI+1): 给力的天使 2011-07-11 10:13:51
弱没有关系，只要有而且测序准确就没有什么问题；
你PCR结果很弱可能原因有以下几点（个人分析）：
1：菌的浓度太大了，导致酶的作用部分丧失，这完全有可能；
2：PCR体系不合适；
3：退火温度的选择不当，这一点很有可能的，因为你循环次数都30次以上了，如果退火温度选择合适，我觉得应该是比较亮的；
4：延伸时间的选择，不知道你的片段多大？如果大片段，你延伸的时间段也会出现条带弱的情况的。

所以自己慢慢一步一步找原因，然后解决问题，加油！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-07-11 09:12:02
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herethere

铁虫 (文坛精英)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
可能菌液加入的量对PCR体系产生影响，需要摸摸条件。。。
赞一下(1人) 回复此楼
The future belongs to those who believe in the beauty of their dreams
4楼2011-09-23 20:29:31
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