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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于农杆菌菌液PCR
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bayleaf1987

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】关于农杆菌菌液PCR已有6人参与

大虾们，实验中遇到了一个神奇的问题，我把连好的载体转化农杆菌，长斑后做了菌落PCR,没有问题，然后挑斑在10ML的管子里摇菌做菌液PCR也没有问题，可是然后我从管子里吸取了一部分菌液到50ML的大管子里摇菌准备做侵染，为了保险起见我用大管子的菌液又做了一次菌液PCR，然后神奇的问题出现了，居然没有条带了，保证任何东西都没有加错。。请问这是什么缘故啊？？？谢谢各位~
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1楼2010-10-15 16:40:02
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临风7071

木虫 (正式写手)
★
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Originally posted by bayleaf1987 at 2010-10-15 16:40:02:
大虾们，实验中遇到了一个神奇的问题，我把连好的载体转化农杆菌，长斑后做了菌落PCR,没有问题，然后挑斑在10ML的管子里摇菌做菌液PCR也没有问题，可是然后我从管子里吸取了一部分菌液到50ML的大管子里摇菌准备做 ...

请问你有农杆菌转基因的方法（侵染植株的）吗？我最近也在做，侵染不上啊，郁闷啊！！
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2楼2010-10-15 16:47:14
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bayleaf1987

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 临风7071 at 2010-10-15 16:47:14:

请问你有农杆菌转基因的方法（侵染植株的）吗？我最近也在做，侵染不上啊，郁闷啊！！

你做的是什么植物啊？这个好像和植物本身很有关系的~
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3楼2010-10-15 17:01:32
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ben1147

木虫 (正式写手)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
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Originally posted by 临风7071 at 2010-10-15 16:47:14:

请问你有农杆菌转基因的方法（侵染植株的）吗？我最近也在做，侵染不上啊，郁闷啊！！

侵染不上是什么意思？转化率低？长得不好？还是什么？

这显然跟取的外植体有关
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4楼2010-10-15 18:26:23
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ben1147

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by bayleaf1987 at 2010-10-15 16:40:02:
大虾们，实验中遇到了一个神奇的问题，我把连好的载体转化农杆菌，长斑后做了菌落PCR,没有问题，然后挑斑在10ML的管子里摇菌做菌液PCR也没有问题，可是然后我从管子里吸取了一部分菌液到50ML的大管子里摇菌准备做 ...

重复一次，确定现象。
有抗生素吗？
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5楼2010-10-15 18:27:01
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怎么都行

银虫 (小有名气)
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dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-10-16 09:00:04
培养基里加入相应抗生素了么，会不会是其他菌占了上风？

要么就是PCR操作有问题，重复一次试试看
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6楼2010-10-15 21:37:56
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taigongzaici

新虫 (小有名气)
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dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-10-16 09:00:26
这样的情况基本属于你操作失误，理论上是不可能的，
1-新鲜菌液
2-正确的抗生素
3-PCR加的正确
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7楼2010-10-16 08:53:44
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临风7071

木虫 (正式写手)
★
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Originally posted by ben1147 at 2010-10-15 18:26:23:

侵染不上是什么意思？转化率低？长得不好？还是什么？

这显然跟取的外植体有关

我做拟南芥的，直接用花浸润的
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8楼2010-10-16 09:30:41
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临风7071

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by bayleaf1987 at 2010-10-15 17:01:32:

你做的是什么植物啊？这个好像和植物本身很有关系的~

拟南芥啊
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9楼2010-10-16 09:31:22
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bayleaf1987

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 临风7071 at 2010-10-16 09:31:22:

拟南芥啊

拟南芥我们一般都是直接蘸花用花葶侵染啊，你是出现什么问题了呢？转化率低？还是其他的？
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10楼2010-10-16 15:32:57
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