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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】菌液PCR结束，肉眼直接看到条带可能不？
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pamuk

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】菌液PCR结束，肉眼直接看到条带可能不？已有9人参与

达人们，做克隆结束，挑选白斑，然后培养，挑选浑浊者检验克隆是否成功；做菌液PCR，琼脂糖跑胶，结束后居然肉眼直接看到条带了，均一性还很好，凝胶成像仪中看确实是有非常亮的条带，这正常不？有没有人PCR结束直接看到条带的？

然后就是条带还是有点弥散，除了最亮那块，以最亮那块位置看，再比较marker，片段明显小了很多，是否是看前面有弥散的位置来看长度，还是看最亮部位？
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1楼2010-09-23 21:31:55
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pamuk

铁虫 (初入文坛)
自己顶，盼高人指点啊。。。。
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2楼2010-09-23 22:09:29
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ben1147

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这个理论上。。。。。。。。。。。
拿什么染的色?
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3楼2010-09-23 22:20:02
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1):哈哈 2010-09-24 15:56:18
伙计，你真牛啊，恭喜你，你的眼睛可以发射UV
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将有能量帮助他人作为自己的人生追求！
4楼2010-09-23 23:19:34
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pamuk

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-09-23 22:20:02:
这个理论上。。。。。。。。。。。
拿什么染的色?

就是用SYBGreen，加在Loading buffer里跑的，确实肉眼看到条带，后面在成像仪中观察就是那里。。。
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5楼2010-09-24 14:32:30
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pamuk

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by zcqcau at 2010-09-23 23:19:34:
伙计，你真牛啊，恭喜你，你的眼睛可以发射UV

哎，PCR有没有这么高效率，不是一次啊，两次都看到了。。。
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6楼2010-09-24 14:33:08
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+2):对 2010-09-24 15:56:04
引用回帖:
Originally posted by pamuk at 2010-09-24 14:33:08:

哎，PCR有没有这么高效率，不是一次啊，两次都看到了。。。

再高效率，可见光下也不能看见啊。。。。。
有说SYBGreen在可见光下也能激发荧光么？还是你看胶的时候周围有紫外？
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7楼2010-09-24 14:36:36
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pamuk

铁虫 (初入文坛)
★ ★
silicare(金币+2):鼓励上图，有些染料的激发波长位于可见光区域，比如goldview等等，好多呢 2010-09-25 08:25:53
引用回帖:
Originally posted by pamuk at 2010-09-23 21:31:55:
达人们，做克隆结束，挑选白斑，然后培养，挑选浑浊者检验克隆是否成功；做菌液PCR，琼脂糖跑胶，结束后居然肉眼直接看到条带了，均一性还很好，凝胶成像仪中看确实是有非常亮的条带，这正常不？有没有人PCR结束直 ...


4个不同克隆子，用3对不同引物，点样孔是在下方，最右边是Marker，比较暗，但是是由于拍照效果影响。
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8楼2010-09-24 14:39:59
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pamuk

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-09-24 14:36:36:

再高效率，可见光下也不能看见啊。。。。。
有说SYBGreen在可见光下也能激发荧光么？还是你看胶的时候周围有紫外？

没有紫外，就是我P完拿胶看到胶上两条淡绿色（或者白色吧）带。。。
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9楼2010-09-24 14:41:47
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pamuk

铁虫 (初入文坛)
上面是图，其他都没有明显条带，在点样孔那留下的亮点一般是什么原因呢？
然后就是往后拖，越来越淡，中间那两条超亮的就是我说能看到东西的带。。。
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10楼2010-09-24 14:44:20
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