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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 菌液pcr有带，扩大培养摇不起来
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芥末猫

银虫 (小有名气)

[交流] 菌液pcr有带，扩大培养摇不起来 已有7人参与

菌液pcr是用的目的基因的引物，有带，想扩大培养但是一直没摇起来，怎么回事啊？一共有四个，其中一个摇起来了，另外三个死活摇不起来了。
    没摇起来证明是没连接上，还是怎么的，因为理论知识相对匮乏，求准确解答，感谢
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1楼 2012-04-27 09:02:08
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张宏宇123

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你做菌落pcr的时候有没有加对照，有时候会出现假阳性。
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未来不是梦
2楼2012-04-27 12:42:43
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steler_ly

铜虫 (正式写手)
★
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极有可能是假阳性。。。
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3楼2012-04-27 17:59:36
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★ ★ ★
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西瓜: 金币+2, 应助指数+1, atlanticwi是很细心的虫虫呢 2012-04-27 19:16:51
嗯..........
我觉得不一定是假阳性哦，若你用的引物能扩出合适分子量来，就没有什么问题的。同时培养基加入抗生素后也尽量摇匀咯，菌虽然好养，但也不是加进培养基就不用管了，注意保持一定的装量，液体不要超过你瓶子或管子容量的50%以上，否则通气量过低，摇不起来也是很麻烦的。
个人看法，若有说错请高手指点
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Let God do with it as He wills
4楼2012-04-27 18:44:13
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madengyu

禁虫 (小有名气)
★
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本帖内容被屏蔽
5楼2012-04-27 19:35:14
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芥末猫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 张宏宇123 at 2012-04-27 12:42:43:
你做菌落pcr的时候有没有加对照，有时候会出现假阳性。

没做对照，对照的话不加菌液？？
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6楼2012-04-27 21:32:24
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张宏宇123

金虫 (著名写手)
★
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你是连接的质粒转化的大肠吗？
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未来不是梦
7楼2012-04-27 22:18:07
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芥末猫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 张宏宇123 at 2012-04-27 22:18:07:
你是连接的质粒转化的大肠吗？

是的
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8楼2012-04-28 09:57:08
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张宏宇123

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-28 10:25:32
建议最好是提质粒进行酶切，用质粒进行pcr，菌落pcr还是不是特别可信，酶切还是最主要的证明方法。
其他摇不起来有可能是杂菌，或者你的抗生素失效。（个人观点）
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未来不是梦
9楼2012-04-28 10:01:17
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
没有摇起来很有可能是质粒已经不存在了。。。
最好还是划线到平板上，这样容易验证的多。。。而且扩大培养是木有任何问题的。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
10楼2012-04-28 11:12:52
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