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菌液pcr有带,扩大培养摇不起来
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菌液pcr有带,扩大培养摇不起来
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菌液pcr是用的目的基因的引物,有带,想扩大培养但是一直没摇起来,怎么回事啊?一共有四个,其中一个摇起来了,另外三个死活摇不起来了。
没摇起来证明是没连接上,还是怎么的,因为理论知识相对匮乏,求准确解答,感谢
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2012-04-27 09:02:08
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张宏宇123
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你做菌落pcr的时候有没有加对照,有时候会出现假阳性。
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2楼
2012-04-27 12:42:43
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极有可能是假阳性。。。
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3楼
2012-04-27 17:59:36
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2012-04-27 19:16:51
嗯..........
我觉得不一定是假阳性哦,若你用的引物能扩出合适分子量来,就没有什么问题的。同时培养基加入抗生素后也尽量摇匀咯,菌虽然好养,但也不是加进培养基就不用管了,注意保持一定的装量,液体不要超过你瓶子或管子容量的50%以上,否则通气量过低,摇不起来也是很麻烦的。
个人看法,若有说错请高手指点
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Let God do with it as He wills
4楼
2012-04-27 18:44:13
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madengyu
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2012-04-27 19:35:14
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2楼
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Originally posted by
张宏宇123
at 2012-04-27 12:42:43:
你做菌落pcr的时候有没有加对照,有时候会出现假阳性。
没做对照,对照的话不加菌液??
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6楼
2012-04-27 21:32:24
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你是连接的质粒转化的大肠吗?
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7楼
2012-04-27 22:18:07
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7楼
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Originally posted by
张宏宇123
at 2012-04-27 22:18:07:
你是连接的质粒转化的大肠吗?
是的
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2012-04-28 09:57:08
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2012-04-28 10:25:32
建议最好是提质粒进行酶切,用质粒进行pcr,菌落pcr还是不是特别可信,酶切还是最主要的证明方法。
其他摇不起来有可能是杂菌,或者你的抗生素失效。(个人观点)
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未来不是梦
9楼
2012-04-28 10:01:17
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没有摇起来很有可能是质粒已经不存在了。。。
最好还是划线到平板上,这样容易验证的多。。。而且扩大培养是木有任何问题的。。。
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2012-04-28 11:12:52
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