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pamuk

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】菌液PCR结束,肉眼直接看到条带可能不? 已有9人参与

达人们,做克隆结束,挑选白斑,然后培养,挑选浑浊者检验克隆是否成功;做菌液PCR,琼脂糖跑胶,结束后居然肉眼直接看到条带了,均一性还很好,凝胶成像仪中看确实是有非常亮的条带,这正常不?有没有人PCR结束直接看到条带的?

然后就是条带还是有点弥散,除了最亮那块,以最亮那块位置看,再比较marker,片段明显小了很多,是否是看前面有弥散的位置来看长度,还是看最亮部位?
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pamuk

铁虫 (初入文坛)

自己顶,盼高人指点啊。。。。
2楼2010-09-23 22:09:29
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ben1147

木虫 (正式写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这个理论上。。。。。。。。。。。
拿什么染的色?
3楼2010-09-23 22:20:02
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看天(金币+1):哈哈 2010-09-24 15:56:18
伙计,你真牛啊,恭喜你,你的眼睛可以发射UV
将有能量帮助他人作为自己的人生追求!
4楼2010-09-23 23:19:34
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pamuk

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-09-23 22:20:02:
这个理论上。。。。。。。。。。。
拿什么染的色?

就是用SYBGreen,加在Loading buffer里跑的,确实肉眼看到条带,后面在成像仪中观察就是那里。。。
5楼2010-09-24 14:32:30
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pamuk

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by zcqcau at 2010-09-23 23:19:34:
伙计,你真牛啊,恭喜你,你的眼睛可以发射UV

哎,PCR有没有这么高效率,不是一次啊,两次都看到了。。。
6楼2010-09-24 14:33:08
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ben1147

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看天(金币+2):对 2010-09-24 15:56:04
引用回帖:
Originally posted by pamuk at 2010-09-24 14:33:08:

哎,PCR有没有这么高效率,不是一次啊,两次都看到了。。。

再高效率,可见光下也不能看见啊。。。。。
有说SYBGreen在可见光下也能激发荧光么?还是你看胶的时候周围有紫外?
7楼2010-09-24 14:36:36
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pamuk

铁虫 (初入文坛)

★ ★
silicare(金币+2):鼓励上图,有些染料的激发波长位于可见光区域,比如goldview等等,好多呢 2010-09-25 08:25:53
引用回帖:
Originally posted by pamuk at 2010-09-23 21:31:55:
达人们,做克隆结束,挑选白斑,然后培养,挑选浑浊者检验克隆是否成功;做菌液PCR,琼脂糖跑胶,结束后居然肉眼直接看到条带了,均一性还很好,凝胶成像仪中看确实是有非常亮的条带,这正常不?有没有人PCR结束直 ...


4个不同克隆子,用3对不同引物,点样孔是在下方,最右边是Marker,比较暗,但是是由于拍照效果影响。
8楼2010-09-24 14:39:59
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pamuk

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-09-24 14:36:36:

再高效率,可见光下也不能看见啊。。。。。
有说SYBGreen在可见光下也能激发荧光么?还是你看胶的时候周围有紫外?

没有紫外,就是我P完拿胶看到胶上两条淡绿色(或者白色吧)带。。。
9楼2010-09-24 14:41:47
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pamuk

铁虫 (初入文坛)

上面是图,其他都没有明显条带,在点样孔那留下的亮点一般是什么原因呢?
然后就是往后拖,越来越淡,中间那两条超亮的就是我说能看到东西的带。。。
10楼2010-09-24 14:44:20
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