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虫虫6527

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR 已有10人参与

我做PCR出来引物带，可能是什么问题？
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1楼 2010-07-19 09:19:22
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ilxly

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):正解 2010-07-19 10:04:01
引物自己配对结合扩增了
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2楼2010-07-19 09:23:10
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aofeng860308

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 虫虫6527 at 2010-07-19 09:19:22:
我做PCR出来引物带，可能是什么问题？

这个问题说不清楚了，影响因素多！
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3楼2010-07-19 09:25:37
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★
看天(金币+1):热心的斑斑 2010-07-19 12:59:59
减少引物用量；提高退火温度；或者将引物混合后94度加热后再加入反应体系中。
祝好运！
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
4楼2010-07-19 10:13:26
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tian1203

银虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用TDPCR程序
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别紧张，我不是什么好人...
5楼2010-07-19 14:12:08
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steamsn

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
二聚体而已,一般情况下,都有的.除非你的引物设计非常好,另外,你可以优化一下引物,引物太多的话,二聚体条带太亮.
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我命由我不由天
6楼2010-07-19 14:57:17
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):感谢交流~~ 2010-07-19 18:00:02
是引物二聚体，如果是做普通PCR则不用管，切胶就去掉了，也可以降低引物浓度，但只能降低引物二聚体形成的量，不能全部去除。如果是做染料法的定量可以用溶解曲线去除引物二聚体形成的荧光值。
原则上讲有引物二聚体则说明引物不合格，需要重新设计引物。
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7楼2010-07-19 15:13:20
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zhaoyuehong

金虫 (小有名气)
这个有点看不懂
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8楼2010-07-19 15:13:30
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yobda

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
最大的可能性是引物量过大，导致pcr受到抑制
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9楼2010-07-20 09:07:42
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shenlin0514

木虫 (正式写手)

无名小虫
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引物的设计问题，一般是形成二聚体，不过你也应该看看你的PCR反应条件，可能退火温度也有影响
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Never say never
10楼2010-07-20 15:08:59
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