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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR拖尾
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精精

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR拖尾已有10人参与

我用细菌338，518扩细菌V3区，以土壤DNA为模板，退火温度61度，延伸20S，结果出来目的片段挺亮的，但是条带拖尾很严重，请教各位大虾这个该如何优化？
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少才微善
1楼2010-12-07 21:06:29
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孙盛楠

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-09 20:18:42
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Originally posted by 精精 at 2010-12-07 21:06:29:
我用细菌338，518扩细菌V3区，以土壤DNA为模板，退火温度61度，延伸20S，结果出来目的片段挺亮的，但是条带拖尾很严重，请教各位大虾这个该如何优化？

个人认为：样品溶解不均匀，存在降解。还可以将胶做薄些，电压低些，慢跑看效果。
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2楼2010-12-08 10:44:26
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精精

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 孙盛楠 at 2010-12-08 10:44:26:


个人认为：样品溶解不均匀，存在降解。还可以将胶做薄些，电压低些，慢跑看效果。

谢谢楼上的，楼上说的很有道理~~我同样的样品，换个人批就没有拖尾，换块胶拖尾程度也不一样
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少才微善
3楼2010-12-09 20:00:21
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tsq0126

金虫 (小有名气)

是不是这样的图啊，我和你做的是一样的

★ ★
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dhd997(金币+1):鼓励上图 2010-12-11 13:58:39
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4楼2010-12-11 12:17:50
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精精

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by tsq0126 at 2010-12-11 12:17:50:

你跑的挺漂亮的，我的拖尾还要严重
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少才微善
5楼2010-12-12 11:04:32
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wwyymm_6

银虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
Originally posted by 孙盛楠 at 2010-12-08 10:44:26:


个人认为：样品溶解不均匀，存在降解。还可以将胶做薄些，电压低些，慢跑看效果。

我也遇到拖尾的问题，不知道楼主解决了没有?
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6楼2011-01-06 10:10:04
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amilie030312

金虫 (正式写手)
PCR时候模板量大了
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7楼2011-01-06 13:21:01
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精精

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wwyymm_6 at 2011-01-06 10:10:04:

我也遇到拖尾的问题，不知道楼主解决了没有?

后来就将就用了，不过跑DGGE影响也不是很严重~~~
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少才微善
8楼2011-01-07 17:10:34
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精精

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by amilie030312 at 2011-01-06 13:21:01:
PCR时候模板量大了

别人也是同样用MOBIO试剂盒提好的DNA为模板扩的，也没有稀释，他就没有拖尾。
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少才微善
9楼2011-01-07 17:11:57
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by 精精 at 2011-01-07 17:11:57:



别人也是同样用MOBIO试剂盒提好的DNA为模板扩的，也没有稀释，他就没有拖尾。

大家用同样的试剂盒但提的DNA质量肯定是不一样的，你提的质量比他的好比他的浓这是非常有可能的
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10楼2011-01-10 15:50:20
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