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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于PCR无结果的原因
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Icityman

铁虫 (小有名气)

[求助] 关于PCR无结果的原因

最近跑的PCR一直不是很顺利，采用的体系和程序都是参照师兄师姐的，自己设计了不同梯度的退火温度，但结果还是没有，除了拖尾还是拖尾，怎么改进优化，请各位高手好心人帮忙解决啊！谢谢！！
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1楼2011-12-06 10:08:29
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bbwalkman

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
Icityman(金币+1): 2011-12-06 10:49:34
1949stone(金币+1): 水一般不会吧 2011-12-06 11:37:55
1.你呢样品没有问题吧，不行换一下
2.看看引物怎么样，是不是不合理还是怎么回事
3.水是不是污染了，换新的看看吧
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2楼2011-12-06 10:18:08
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Icityman

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bbwalkman at 2011-12-06 10:18:08:
1.你呢样品没有问题吧，不行换一下
2.看看引物怎么样，是不是不合理还是怎么回事
3.水是不是污染了，换新的看看吧

这个。。样品是师姐给的，引物时我参照codehop自己设计出来的，照讲有拖尾就应该是扩增出来了啊，水污染的可能性比较小吧
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3楼2011-12-06 10:51:03
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xiali-yu

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 后一个 估计一般同学不会犯 2011-12-06 11:38:33
Icityman(金币+9): 1 2011-12-07 10:01:02
模板浓度你知道不？如果模板浓度过高，pcr也不会出来产物，还有就是引物前后向浓度是否一致也会对结果有影响，建议用大公司合成隐物

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2011-12-06 10:57:59
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A406

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wanhscn(金币+5): 鼓励新虫友发帖！ 2011-12-06 14:52:51
个人觉得拿来的样品，引物，程序等自己先进行下确认，这些是否是你要的，模板是否符合PCR，设个质粒的阳性对照，引物会不会是按CDNA设计的而你用基因组当模板？我们实验室就出现过这种低级错误，
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5楼2011-12-06 13:25:51
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陈小菡

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-12-06 22:57:05
拖尾现象是由于支持介质的表面对被分离的样品有一定的吸附作用，使分离样品滞留而降低了电泳速度。我个人觉得更新一下电泳缓冲液，不知道对不对。
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6楼2011-12-06 16:05:41
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julietguo

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 欢迎常来哦 2011-12-06 22:57:21
模板、引物和dNTP反复冻融会影响PCR扩增效果的，你要不要换个新的模板试试？
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7楼2011-12-06 16:06:50
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robert1988

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励交流经验 2011-12-06 22:57:30
延长一下延伸的时间试试，我也不知道为什么，不过上次这么处理了之后好很多，可以尝试一下。
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8楼2011-12-06 22:25:01
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暧醉殇

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

首先，先看看你的模板DNA是否降解了。然后，再检查下你所用的PCR反应的东西是否变质了。如果上面两个都没有问题，那么你可以试着降低退火的温度，但是也不能降得太低了。
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9楼2011-12-06 22:59:23
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情系石河子

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

看看引物是不是 合适
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吃地苦中苦，方为人上人
10楼2011-12-07 09:32:20
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