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Icityman

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[求助] 关于PCR无结果的原因

最近跑的PCR一直不是很顺利，采用的体系和程序都是参照师兄师姐的，自己设计了不同梯度的退火温度，但结果还是没有，除了拖尾还是拖尾，怎么改进优化，请各位高手好心人帮忙解决啊！谢谢！！

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1楼 2011-12-06 10:08:29

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A406

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wanhscn(金币+5): 鼓励新虫友发帖！ 2011-12-06 14:52:51

个人觉得拿来的样品，引物，程序等自己先进行下确认，这些是否是你要的，模板是否符合PCR，设个质粒的阳性对照，引物会不会是按CDNA设计的而你用基因组当模板？我们实验室就出现过这种低级错误，

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5楼2011-12-06 13:25:51

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bbwalkman

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【答案】应助回帖

★
Icityman(金币+1): 2011-12-06 10:49:34
1949stone(金币+1): 水一般不会吧 2011-12-06 11:37:55

1.你呢样品没有问题吧，不行换一下
2.看看引物怎么样，是不是不合理还是怎么回事
3.水是不是污染了，换新的看看吧

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2楼2011-12-06 10:18:08

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Icityman

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引用回帖:

2楼: Originally posted by bbwalkman at 2011-12-06 10:18:08:
1.你呢样品没有问题吧，不行换一下
2.看看引物怎么样，是不是不合理还是怎么回事
3.水是不是污染了，换新的看看吧

这个。。样品是师姐给的，引物时我参照codehop自己设计出来的，照讲有拖尾就应该是扩增出来了啊，水污染的可能性比较小吧

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3楼2011-12-06 10:51:03

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xiali-yu

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【答案】应助回帖

★
1949stone(金币+1): 后一个估计一般同学不会犯 2011-12-06 11:38:33
Icityman(金币+9): 1 2011-12-07 10:01:02

模板浓度你知道不？如果模板浓度过高，pcr也不会出来产物，还有就是引物前后向浓度是否一致也会对结果有影响，建议用大公司合成隐物

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

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4楼2011-12-06 10:57:59

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