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Icityman

铁虫 (小有名气)

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4楼: Originally posted by xiali-yu at 2011-12-06 10:57:59:
模板浓度你知道不?如果模板浓度过高,pcr也不会出来产物,还有就是引物前后向浓度是否一致也会对结果有影响,建议用大公司合成隐物
[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

50的体系我用了大概50的DNA,引物时生工合成的,前后浓度肯定一样的
11楼2011-12-07 10:02:05
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Icityman

铁虫 (小有名气)

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5楼: Originally posted by A406 at 2011-12-06 13:25:51:
个人觉得拿来的样品,引物,程序等自己先进行下确认,这些是否是你要的,模板是否符合PCR,设个质粒的阳性对照,引物会不会是按CDNA设计的而你用基因组当模板?我们实验室就出现过这种低级错误,

模板用的是我师姐的DNA,应该没什么问题
12楼2011-12-07 10:03:03
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铁虫 (小有名气)

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6楼: Originally posted by 陈小菡 at 2011-12-06 16:05:41:
拖尾现象是由于支持介质的表面对被分离的样品有一定的吸附作用,使分离样品滞留而降低了电泳速度。我个人觉得更新一下电泳缓冲液,不知道对不对。

但是同样的缓冲液实验室其他的人都能跑出来了,我觉得与这个应该没有关系
13楼2011-12-07 10:04:17
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铁虫 (小有名气)

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8楼: Originally posted by robert1988 at 2011-12-06 22:25:01:
延长一下延伸的时间试试,我也不知道为什么,不过上次这么处理了之后好很多,可以尝试一下。

好的,试试看,谢谢
14楼2011-12-07 10:04:45
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Icityman

铁虫 (小有名气)

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7楼: Originally posted by julietguo at 2011-12-06 16:06:50:
模板、引物和dNTP反复冻融会影响PCR扩增效果的,你要不要换个新的模板试试?

一直在尝试不同的模板,引物之类的都是分装着用的
15楼2011-12-07 10:05:31
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铁虫 (小有名气)

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9楼: Originally posted by 暧醉殇 at 2011-12-06 22:59:23:
首先,先看看你的模板DNA是否降解了。然后,再检查下你所用的PCR反应的东西是否变质了。如果上面两个都没有问题,那么你可以试着降低退火的温度,但是也不能降得太低了。

我这段时间一直在尝试不同的模板和不同的退火温度,哎,就是没结果啊
16楼2011-12-07 10:06:28
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Icityman

铁虫 (小有名气)

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10楼: Originally posted by 情系石河子 at 2011-12-07 09:32:20:
看看引物是不是 合适

这个嘛,我个人觉得应该没什么问题,照说有拖尾就应该有克隆出来啊
17楼2011-12-07 10:07:33
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暧醉殇

捐助贵宾 (小有名气)


这个情况我也碰到过。。。我上次做PCR做了一个暑假都没出结果!但是现在刚开学回来一坐就成功了。。。我觉得做这个受很多方面的因素影响,比如实验室洁净程度,仪器设备,然后操作都会对实验产生较大的影响。
18楼2011-12-07 12:30:43
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铁虫 (小有名气)

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18楼: Originally posted by 暧醉殇 at 2011-12-07 12:30:43:
这个情况我也碰到过。。。我上次做PCR做了一个暑假都没出结果!但是现在刚开学回来一坐就成功了。。。我觉得做这个受很多方面的因素影响,比如实验室洁净程度,仪器设备,然后操作都会对实验产生较大的影响。

我现在郁闷死了啊,一直没有结果
19楼2011-12-07 18:01:17
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simian1992

新虫 (初入文坛)

你的酶有没有问题啊?你可以换个酶试一下。
20楼2013-11-25 18:48:43
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