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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】进行pcr克隆时，出现拖尾现象
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tanlianren

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】进行pcr克隆时，出现拖尾现象 已有5人参与

我只是进行普通的pcr克隆，结果会出现拖尾现象，虽然目的条带较亮，可以看清楚，但是整个泳道都是白白的一片，将所有东西全部换新后，依然存在，请各位大侠帮忙解答。
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1楼 2010-07-04 20:39:20
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-07-04 22:51:03
略微升高退火温度、降低循环、降低镁离子，调整这三个条件中的任意一个，应该可以改善。目前这种拖带，跟引物的特异性有关系，也许跟模板也有一定的关系。

不知道楼主实验的目的是什么，在我看来PCR跑成这样可以认为结果比较好，拖带有的时候不需要调整，很多实验没有必要追求过分的完美，关键看是否能够实现实验目的
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2楼2010-07-04 20:58:07
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tanlianren

银虫 (初入文坛)
scelab:race成这样已经很好了哇~~~ 2010-07-04 22:51:33
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-07-04 20:58:07:
略微升高退火温度、降低循环、降低镁离子，调整这三个条件中的任意一个，应该可以改善。目前这种拖带，跟引物的特异性有关系，也许跟模板也有一定的关系。

不知道楼主实验的目的是什么，在我看来PCR跑成这样可 ...

我是做的3`race，需要进行胶回收的，你说跟模板有关，是不是说我的引物和反转录产品中的太多模板可以结合，造成的非特异性扩增。
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3楼2010-07-04 21:14:36
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
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scelab(金币+2):正解~~~ 2010-07-04 22:51:54
引用回帖:
Originally posted by tanlianren at 2010-07-04 21:14:36:

我是做的3`race，需要进行胶回收的，你说跟模板有关，是不是说我的引物和反转录产品中的太多模板可以结合，造成的非特异性扩增。

如果你是做3RACE，我认为PCR结果已经非常漂亮了，不需要做任何调整，切胶切得干净一点，从带的亮度看，你做个40ul体系的PCR，全部点样回收，做克隆应该足够了
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4楼2010-07-04 21:19:25
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xiaoru2010

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by tanlianren at 2010-07-04 21:14:36:

我是做的3`race，需要进行胶回收的，你说跟模板有关，是不是说我的引物和反转录产品中的太多模板可以结合，造成的非特异性扩增。

对呀，楼上正解。已经做的这么好了，将目的带回收克隆测序就很好了。
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5楼2010-07-05 08:47:22
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
同意 做race这样直接回收就可以了 没有问题 我就是这么做的
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6楼2010-07-06 19:13:33
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
PCR能扩出这样的片段已经非常好了，经纯化试剂盒回收纯化后就没什么问题了
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
7楼2010-07-07 00:02:41
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