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tanlianren

银虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】进行pcr克隆时，出现拖尾现象已有5人参与

我只是进行普通的pcr克隆，结果会出现拖尾现象，虽然目的条带较亮，可以看清楚，但是整个泳道都是白白的一片，将所有东西全部换新后，依然存在，请各位大侠帮忙解答。

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1楼 2010-07-04 20:39:20

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yujiaping1

木虫 (著名写手)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-07-04 22:51:03

略微升高退火温度、降低循环、降低镁离子，调整这三个条件中的任意一个，应该可以改善。目前这种拖带，跟引物的特异性有关系，也许跟模板也有一定的关系。

不知道楼主实验的目的是什么，在我看来PCR跑成这样可以认为结果比较好，拖带有的时候不需要调整，很多实验没有必要追求过分的完美，关键看是否能够实现实验目的

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2楼2010-07-04 20:58:07

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tanlianren

银虫 (初入文坛)

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scelab:race成这样已经很好了哇~~~ 2010-07-04 22:51:33

引用回帖:

Originally posted by yujiaping1 at 2010-07-04 20:58:07:
略微升高退火温度、降低循环、降低镁离子，调整这三个条件中的任意一个，应该可以改善。目前这种拖带，跟引物的特异性有关系，也许跟模板也有一定的关系。

不知道楼主实验的目的是什么，在我看来PCR跑成这样可 ...

我是做的3`race，需要进行胶回收的，你说跟模板有关，是不是说我的引物和反转录产品中的太多模板可以结合，造成的非特异性扩增。

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3楼2010-07-04 21:14:36

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