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diduqiong

木虫 (初入文坛)

[交流] PCR拖尾怎么办~~~~~ 已有11人参与

PCR的东西  大小正确 但是下面怎么跟彗星似的  糊糊的 各位大侠有木有碰到过 该怎么办



[ Last edited by diduqiong on 2011-9-6 at 19:24 ]
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zlu520

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狗屎养鲜花
1楼 2011-09-07 09:52:29
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zlu520

至尊木虫 (职业作家)

限制人
★
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送鲜花一朵
引用回帖:
1楼: Originally posted by diduqiong at 2011-09-07 09:52:29:
PCR的东西  大小正确 但是下面怎么跟彗星似的  糊糊的 各位大侠有木有碰到过 该怎么办

样品dna可能降解了，胶薄些，电压低点。
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无完人！
2楼2011-09-07 10:07:05
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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dhd997(金币+3): good 2011-09-07 11:17:04
条件控制严紧些。
具体的可以提高一下退火温度；模板质量好点，量少点；酶的量少点；Mg2+少点，引物少点、dNTP少点。自己看看加的东西哪种多了，如果都是标准加入量，那就从退火温度和模板浓度着手看看
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3楼2011-09-07 10:07:49
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diduqiong

木虫 (初入文坛)
内容已删除
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狗屎养鲜花
4楼2011-09-07 15:18:54
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diduqiong

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zlu520 at 2011-09-06 14:07:05:
样品dna可能降解了，胶薄些，电压低点。

谢谢  再做块胶跑一下
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狗屎养鲜花
5楼2011-09-07 15:21:23
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diduqiong

木虫 (初入文坛)
截图传了上来 大家看看
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狗屎养鲜花
6楼2011-09-07 15:25:15
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yuxia82012

木虫 (著名写手)
★
1949stone(金币+1): 差不多 2011-09-07 19:38:39
我觉得你可以提高退火温度就能解决了，这个跑出来应该是不特异的原因造成的
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在等待中涅槃重生
7楼2011-09-07 15:27:57
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根
★ ★ ★ ★
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dhd997(金币+3): good 2011-09-07 18:05:27
两个问题：1 扩增特异性不好 2 pcr产量很低。具体可参照http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3571297&fpage=1
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真相是最大的奢侈品
8楼2011-09-07 16:59:30
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)
★ ★
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wanhscn(金币+1): 是的。有些同学恨不得把一管子酶都倒进去，显然酶多了，不利于特异性扩增！ 2011-09-07 17:43:19
用质粒做模板那时相当容易扩增的。不知道你质粒浓度怎样，如果说拿基因组DNA做模板，上1ul刚好看到就可以了，质粒0.5ul可能多了。酶是多大浓度啊？表太多~
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9楼2011-09-07 17:10:18
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-09-07 18:05:40
用质粒做模板那时相当容易扩增的。不知道你质粒浓度怎样，如果说拿基因组DNA做模板，上1ul刚好看到就可以了，质粒0.5ul可能多了。酶是多大浓度啊？表太多~
赞一下(2人) 回复此楼
10楼2011-09-07 17:39:51
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