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PCR拖尾怎么办~~~~~
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diduqiong
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[交流]
PCR拖尾怎么办~~~~~
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PCR的东西 大小正确 但是下面怎么跟彗星似的 糊糊的 各位大侠有木有碰到过 该怎么办
[
Last edited by diduqiong on 2011-9-6 at 19:24
]
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1楼
2011-09-07 09:52:29
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1楼
:
Originally posted by
diduqiong
at 2011-09-07 09:52:29:
PCR的东西 大小正确 但是下面怎么跟彗星似的 糊糊的 各位大侠有木有碰到过 该怎么办
样品dna可能降解了,胶薄些,电压低点。
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无完人!
2楼
2011-09-07 10:07:05
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dhd997(金币+3): good 2011-09-07 11:17:04
条件控制严紧些。
具体的可以提高一下退火温度;模板质量好点,量少点;酶的量少点;Mg2+少点,引物少点、dNTP少点。自己看看加的东西哪种多了,如果都是标准加入量,那就从退火温度和模板浓度着手看看
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3楼
2011-09-07 10:07:49
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2011-09-07 15:18:54
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2楼
:
Originally posted by
zlu520
at 2011-09-06 14:07:05:
样品dna可能降解了,胶薄些,电压低点。
谢谢 再做块胶跑一下
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5楼
2011-09-07 15:21:23
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2011-09-07 15:25:15
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1949stone(金币+1): 差不多 2011-09-07 19:38:39
我觉得你可以提高退火温度就能解决了,这个跑出来应该是不特异的原因造成的
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7楼
2011-09-07 15:27:57
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dhd997(金币+3): good 2011-09-07 18:05:27
两个问题:1 扩增特异性不好 2 pcr产量很低。具体可参照
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3571297&fpage=1
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2011-09-07 16:59:30
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wanhscn(金币+1): 是的。有些同学恨不得把一管子酶都倒进去,显然酶多了,不利于特异性扩增! 2011-09-07 17:43:19
用质粒做模板那时相当容易扩增的。不知道你质粒浓度怎样,如果说拿基因组DNA做模板,上1ul刚好看到就可以了,质粒0.5ul可能多了。酶是多大浓度啊?表太多~
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2011-09-07 17:10:18
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dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-09-07 18:05:40
用质粒做模板那时相当容易扩增的。不知道你质粒浓度怎样,如果说拿基因组DNA做模板,上1ul刚好看到就可以了,质粒0.5ul可能多了。酶是多大浓度啊?表太多~
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