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yabing0324

金虫 (职业作家)

[交流] 【求助/交流】大家帮我分析一下，为什么PCR产物电泳拖尾严重

PCR体系：总体积25μL； MgCl2,1.6μL；  Taq buffer 2.5μL； dNTP 2μL； Taq酶0.2μL； 上下游引物和模板各1μL
Marker 为DL2000

模板的浓度为50ng/μL，260/280 为1.86, 260/230为1.2
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1楼 2011-01-03 17:57:08
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

susizheng

木虫 (著名写手)
yabing0324(金币+3): 2011-01-03 21:26:50
上样量大就这样，正常现象，特异性条带很明显，切胶回收就是。
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5楼2011-01-03 20:41:29
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普通回帖

dyb831029

铜虫 (小有名气)
yabing0324(金币+1): 2011-01-03 21:26:15
大家给点建议！
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2楼2011-01-03 18:49:19
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天使托

专家顾问 (职业作家)
yabing0324(金币+3): 2011-01-03 21:26:31
你点的太多了，点样量可以稍微减少一点！看你PCR条带比较亮所以没有必要多点！
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3楼2011-01-03 19:04:03
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lpfxmc

木虫 (初入文坛)
yabing0324(金币+3): 2011-01-03 21:26:38
模板量也有点大，可以考虑减少模板量
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4楼2011-01-03 20:37:20
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yabing0324

金虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by dyb831029 at 2011-01-03 18:49:19:
大家给点建议！

谢谢O(∩_∩)O
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6楼2011-01-03 21:28:01
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yabing0324

金虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-01-03 19:04:03:
你点的太多了，点样量可以稍微减少一点！看你PCR条带比较亮所以没有必要多点！

谢谢，我用中孔梳子，点5微升的样
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7楼2011-01-03 21:38:21
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yabing0324

金虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-01-03 20:41:29:
上样量大就这样，正常现象，特异性条带很明显，切胶回收就是。

好的，非常感谢！
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8楼2011-01-03 21:39:02
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yabing0324

金虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by lpfxmc at 2011-01-03 20:37:20:
模板量也有点大，可以考虑减少模板量

谢谢建议，下次我试一试
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9楼2011-01-03 21:40:17
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yabing0324

金虫 (职业作家)
今天上样量减少到4微升，还是不行，还拖
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10楼2011-01-04 21:57:42
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翱宇

禁虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你样品第4、5和最后一道没有拖尾，所以可以排除是跑胶、加样方面的技术问题，应该是你样品PCR扩增的特异性问题。拖后的条带会是什么这点很重要？
是取样时有酶蛋白拖住了PCR样品吗？还是其他的问题，这个还是有经验的人给你意见吧，建议自己也去网上查查！
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11楼2011-01-04 22:43:34
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baiyongqin

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
或许是loading buffer出问题了
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12楼2012-06-13 16:50:20
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