应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】pcr问题求助
91/1返回列表
查看: 1135  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

牵着猎人的狼

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】pcr问题求助 已有8人参与

请问谁p过真菌的ITS?
小半年了，一直p都没p出来，ITS应该是很保守的序列，我p的是尖孢镰刀菌的。
我用的引物是：
ITS4：TCC TCC gCT TAT TgA TAT gC       Tm：55.75
ITS5：ggA Agg TAA AAg TCA Agg             Tm：52.74
我的体系是：20
双蒸水：12
10*buffer：2
镁离子：1.5
dNTP：1
P1：1
P2：1
模版：1
Taq酶：0.5
程序：94度5min，94度30s，44度45s，72度1min(30 cycle) 72度10min 4度保存。
请指教，不胜感激
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-05-26 20:11:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuezhen

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这么低的退火温度还P不出来，会不会是模板的原因？引物酶问题吧？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-05-26 20:14:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

牵着猎人的狼

银虫 (小有名气)
实验室师兄用相同的体系，药品，引物，程序p出来过，模版DNA条带很亮。
赞一下 回复此楼
3楼2010-05-26 20:31:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-27 00:04:47
20ul 体系一般模板 酶 引物都加0.4微升啊~我是这样的体系!退火温度低，一般都在50以上！
赞一下(2人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2010-05-26 20:32:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gastrodia

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
72度延伸1min是不是有点短啊
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-05-26 21:01:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

langgenet

木虫 (正式写手)

狼哥
不懂，顶下～～～
回复此楼
细节决定成败
6楼2010-05-26 21:10:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shangshang

木虫 (正式写手)

pcr

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你dNTP浓度是多大的？如果是10mM的，你就加的有点多了。
赞一下(1人) 回复此楼
学无止境
7楼2010-05-27 08:38:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weekend883

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
退火温度太低了，我做的时候用的50度，楼主各成分的添加量都有点大，模板的浓度很重要，如果模板浓度大的话，那你添加这些就太多了
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-05-27 09:11:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

darwinxie

铁杆木虫 (职业作家)

自强瓜族族长-----呆瓜大叔
好p才是啊
回复此楼
一切都会好的，雨后的天空更加明朗！人生苦短，快乐至上，加油！
9楼2010-05-27 09:28:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 牵着猎人的狼 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +6 一鸭鸭哟 2026-03-14 7/350 2026-03-15 22:12 by Winj1e
[考研] 一志愿985，本科211，0817化学工程与技术319求调剂 +3 Liwangman 2026-03-15 3/150 2026-03-15 18:16 by JourneyLucky
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 341求调剂 +4 番茄头--- 2026-03-10 4/200 2026-03-13 23:12 by JourneyLucky
[考研] 341求调剂 +3 番茄头--- 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:07 by JourneyLucky
[考研] 332求调剂 +3 zjy101327 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:48 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中科院，化学方向，295求调剂 +4 一氧二氮 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:35 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +9 ADT 2026-03-11 9/450 2026-03-13 21:55 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[考研] 332求调剂 +3 Zz版 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:36 by 18595523086
[考研] 材料与化工085600调剂求老师收留 +9 jiaanl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 20:22 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕350 求调剂 +4 王金科 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:02 by ruiyingmiao
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 282分材料专业求调剂院校 +18 枫桥ZL 2026-03-09 25/1250 2026-03-13 10:47 by 白夜悠长
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生，2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
[考研] 290求调剂 +3 柯淮然 2026-03-10 8/400 2026-03-11 13:48 by 柯淮然
[硕博家园] 木虫好像不热闹了，是不是？ +4 偏振片 2026-03-10 4/200 2026-03-10 09:51 by longwave
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭