24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1168  |  回复: 8

牵着猎人的狼

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】pcr问题求助 已有8人参与

请问谁p过真菌的ITS?
小半年了,一直p都没p出来,ITS应该是很保守的序列,我p的是尖孢镰刀菌的。
我用的引物是:
ITS4:TCC TCC gCT TAT TgA TAT gC       Tm:55.75
ITS5:ggA Agg TAA AAg TCA Agg             Tm:52.74
我的体系是:20
双蒸水:12
10*buffer:2
镁离子:1.5
dNTP:1
P1:1
P2:1
模版:1
Taq酶:0.5
程序:94度5min,94度30s,44度45s,72度1min(30 cycle) 72度10min 4度保存。
请指教,不胜感激
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuezhen

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这么低的退火温度还P不出来,会不会是模板的原因?引物酶问题吧?
2楼2010-05-26 20:14:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

牵着猎人的狼

银虫 (小有名气)

实验室师兄用相同的体系,药品,引物,程序p出来过,模版DNA条带很亮。
3楼2010-05-26 20:31:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-05-27 00:04:47
20ul 体系一般模板 酶 引物都加0.4微升啊~我是这样的体系!退火温度低,一般都在50以上!
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2010-05-26 20:32:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gastrodia

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
72度延伸1min是不是有点短啊
5楼2010-05-26 21:01:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

langgenet

木虫 (正式写手)

狼哥

不懂,顶下~~~
细节决定成败
6楼2010-05-26 21:10:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shangshang

木虫 (正式写手)

pcr


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你dNTP浓度是多大的?如果是10mM的,你就加的有点多了。
学无止境
7楼2010-05-27 08:38:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weekend883

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
退火温度太低了,我做的时候用的50度,楼主各成分的添加量都有点大,模板的浓度很重要,如果模板浓度大的话,那你添加这些就太多了
8楼2010-05-27 09:11:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

darwinxie

铁杆木虫 (职业作家)

自强瓜族族长-----呆瓜大叔

好p才是啊
一切都会好的,雨后的天空更加明朗!人生苦短,快乐至上,加油!
9楼2010-05-27 09:28:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 牵着猎人的狼 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 302分求调剂 一志愿安徽大学085601 +8 zyx上岸! 2026-04-04 8/400 2026-04-05 23:08 by lbsjt
[考研] 308求调剂 +3 终不似从前 2026-04-05 3/150 2026-04-05 22:23 by hemengdong
[考研] 求调剂 +6 chenxrlkx 2026-04-05 6/300 2026-04-05 22:05 by imissbao
[考研] 262求调剂 +7 天下第一文 2026-04-04 8/400 2026-04-05 21:31 by 激流勇渡
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +10 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-04 10/500 2026-04-05 18:51 by 蓝云思雨
[考研] 材料调剂 +13 一样YWY 2026-04-03 14/700 2026-04-05 18:20 by 蓝云思雨
[考研] 296材料专硕求调剂 +21 202451007219 2026-04-02 22/1100 2026-04-04 21:48 by hemengdong
[考研] 一志愿华南师范361分,化学求调剂 +7 Nicole88888 2026-04-01 7/350 2026-04-04 18:28 by macy2011
[考研] 363求调剂 +7 zh096 2026-04-04 7/350 2026-04-04 17:13 by dongzh2009
[考研] 282求调剂 +20 ycy1201 2026-04-01 22/1100 2026-04-04 00:42 by userper
[考研] 288求调剂 一志愿哈工大 材料与化工 +39 洛神哥哥 2026-03-31 41/2050 2026-04-03 21:51 by qlm5820
[考研] 考研调剂 +5 小sun要好运 2026-04-03 5/250 2026-04-03 21:43 by 啵啵啵0119
[考研] 求材料调剂 一志愿南昌大学 328分 +5 yyy..... 2026-04-03 5/250 2026-04-03 13:46 by 百灵童888
[考研] 一志愿北京交通大学材料工程总分358 +4 cs0106 2026-04-03 4/200 2026-04-03 13:41 by 百灵童888
[考研] 302求调剂 +9 zyx上岸! 2026-04-02 9/450 2026-04-02 23:07 by 马儿快快地跑
[考研] 一志愿北京科技大学085601材料工程英一数二初试总分335求调剂 +8 双马尾痞老板2 2026-04-02 9/450 2026-04-02 14:45 by 5896
[考研] 能源动力 调剂 +3 不破不立0 2026-04-02 3/150 2026-04-02 12:46 by ffffjjjj
[考研] 303分 0807学硕求调剂 +3 TYC3632 2026-04-01 3/150 2026-04-01 19:24 by lwk2004
[考研] 【调剂】一志愿厦大生物与医药调剂 +3 Echo虾米 2026-03-31 3/150 2026-04-01 08:40 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中海洋320化学工程与技术学硕求调剂 +8 披星河 2026-03-30 8/400 2026-03-31 08:53 by lbsjt
信息提示
请填处理意见