应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】pcr问题求助
91/1返回列表
查看: 1150  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

牵着猎人的狼

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】pcr问题求助 已有8人参与

请问谁p过真菌的ITS?
小半年了，一直p都没p出来，ITS应该是很保守的序列，我p的是尖孢镰刀菌的。
我用的引物是：
ITS4：TCC TCC gCT TAT TgA TAT gC       Tm：55.75
ITS5：ggA Agg TAA AAg TCA Agg             Tm：52.74
我的体系是：20
双蒸水：12
10*buffer：2
镁离子：1.5
dNTP：1
P1：1
P2：1
模版：1
Taq酶：0.5
程序：94度5min，94度30s，44度45s，72度1min(30 cycle) 72度10min 4度保存。
请指教，不胜感激
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-05-26 20:11:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuezhen

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这么低的退火温度还P不出来，会不会是模板的原因？引物酶问题吧？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-05-26 20:14:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

牵着猎人的狼

银虫 (小有名气)
实验室师兄用相同的体系，药品，引物，程序p出来过，模版DNA条带很亮。
赞一下 回复此楼
3楼2010-05-26 20:31:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-27 00:04:47
20ul 体系一般模板 酶 引物都加0.4微升啊~我是这样的体系!退火温度低，一般都在50以上！
赞一下(2人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2010-05-26 20:32:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gastrodia

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
72度延伸1min是不是有点短啊
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-05-26 21:01:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

langgenet

木虫 (正式写手)

狼哥
不懂，顶下～～～
回复此楼
细节决定成败
6楼2010-05-26 21:10:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shangshang

木虫 (正式写手)

pcr

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你dNTP浓度是多大的？如果是10mM的，你就加的有点多了。
赞一下(1人) 回复此楼
学无止境
7楼2010-05-27 08:38:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weekend883

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
退火温度太低了，我做的时候用的50度，楼主各成分的添加量都有点大，模板的浓度很重要，如果模板浓度大的话，那你添加这些就太多了
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-05-27 09:11:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

darwinxie

铁杆木虫 (职业作家)

自强瓜族族长-----呆瓜大叔
好p才是啊
回复此楼
一切都会好的，雨后的天空更加明朗！人生苦短，快乐至上，加油！
9楼2010-05-27 09:28:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 牵着猎人的狼 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 0703化学调剂 ，六级已过，有科研经历 +14 曦熙兮 2026-03-15 14/700 2026-03-21 19:12 by ColorlessPI
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +3 石瑞0426 2026-03-19 3/150 2026-03-21 18:59 by RRRKKK
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[基金申请] 学校已经提交到NSFC，还能修改吗？ 40+4 babangida 2026-03-19 9/450 2026-03-21 16:12 by babangida
[考研] 310求调剂 +3 baibai1314 2026-03-16 3/150 2026-03-21 03:56 by JourneyLucky
[考研] 材料 336 求调剂 +3 An@. 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:39 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华南师大 070300（化学）304分求调剂 +3 0703武芊慧雪304 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:48 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:32 by JourneyLucky
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +15 陌の森林 2026-03-18 15/750 2026-03-20 23:28 by JourneyLucky
[考研] 一志愿苏州大学材料求调剂，总分315（英一） +5 sbdksD 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:10 by luoyongfeng
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
[考研] 261求B区调剂，科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂，一志愿华南理工大学071005 +5 ioodiiij 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:22 by zcl123
[考研] 一志愿985，本科211，0817化学工程与技术319求调剂 +10 Liwangman 2026-03-15 10/500 2026-03-19 10:25 by 无际的草原
[考研] 材料专硕306英一数二 +10 z1z2z3879 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:20 by 007_lilei
[考研] 0703化学336分求调剂 +6 zbzihdhd 2026-03-15 7/350 2026-03-18 09:53 by zhukairuo
[考研] 293求调剂 +11 zjl的号 2026-03-16 16/800 2026-03-18 08:10 by zhukairuo
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油！? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭