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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】PCR相关问题
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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR相关问题 已有3人参与

做巢式PCR是不是要用梯度PCR仪？梯度PCR仪进口和国产的都有哪些？哪个公司的好呢？大概得多少钱？
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1楼 2010-10-19 18:41:59
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
可以不用的其实~~
PCR仪不要用国产的
进口的诸如ABI、Biorad、eppendorf都不错
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2楼2010-10-19 21:38:14
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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-10-19 21:38:14:
可以不用的其实~~
PCR仪不要用国产的
进口的诸如ABI、Biorad、eppendorf都不错

可以不用？用普通的PCR仪就可以吗？
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3楼2010-10-19 22:24:16
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
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Originally posted by piaoyuaaa at 2010-10-19 22:24:16:

可以不用？用普通的PCR仪就可以吗？

是啊~~引物的退火温度，其实可以很容易就判断出来的
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4楼2010-10-19 22:52:02
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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-10-19 22:52:02:


是啊~~引物的退火温度，其实可以很容易就判断出来的

可是我用的那个是降落PCR程序，退火温度在30s内从65℃降到55℃。普通的PCR仪可以达到吗，没做过这方面的实验，所以不是很清楚。谢谢了
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5楼2010-10-19 23:03:44
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
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Originally posted by piaoyuaaa at 2010-10-19 23:03:44:

可是我用的那个是降落PCR程序，退火温度在30s内从65℃降到55℃。普通的PCR仪可以达到吗，没做过这方面的实验，所以不是很清楚。谢谢了

降落PCR跟巢式与梯度之间是完全不同的概念
不带降落功能的最简陋的PCR仪，也可以通过设程序来实现降落，就是麻烦一点而已
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6楼2010-10-19 23:18:30
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by piaoyuaaa at 2010-10-19 23:03:44:

可是我用的那个是降落PCR程序，退火温度在30s内从65℃降到55℃。普通的PCR仪可以达到吗，没做过这方面的实验，所以不是很清楚。谢谢了

而且你说的那个是升降温速度，并不是降落………………
或许你说的是30个cycles？
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7楼2010-10-19 23:19:20
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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)
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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-10-19 23:19:20:


而且你说的那个是升降温速度，并不是降落………………
或许你说的是30个cycles？

PCR 扩增程序：94℃预变性5min，然后采用touch down PCR 程序，2 0 个循环(9 4℃变性1min；退火温度从65℃到55℃，退火30s；72℃延伸3min)，再于恒定的退火温度下进行10 个循环(94℃变性1min，55℃退火30s，72℃延伸3min)，最后72℃再延伸10min。
就是这样一个程序，请问普通PCR仪可以做到吗？
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8楼2010-10-19 23:29:41
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
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lstt09nk(金币+1):谢谢参与 2010-11-24 13:08:00
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Originally posted by piaoyuaaa at 2010-10-19 23:29:41:

PCR 扩增程序：94℃预变性5min，然后采用touch down PCR 程序，2 0 个循环(9 4℃变性1min；退火温度从65℃到55℃，退火30s；72℃延伸3min)，再于恒定的退火温度下进行10 个循环(94℃变性1min，55℃退火30s，72 ...

完全没问题
只需把每个循环单独抽出来设成“一个循环”（真纠结的说法），后一个比前一个低0.5℃
除非你的PCR仪不支持设很多个这样的步骤
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9楼2010-10-19 23:36:56
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piaoyuaaa

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-10-19 23:36:56:


完全没问题
只需把每个循环单独抽出来设成“一个循环”（真纠结的说法），后一个比前一个低0.5℃
除非你的PCR仪不支持设很多个这样的步骤

哦，这样啊，恩，说得很对，那一般的PCR仪都能设这么多步骤吗？因为现在的情况是老板让我查一下，什么型号的PCR仪看符合我的实验需要，而我也不太懂这些，所以。。。。
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10楼2010-10-19 23:46:18
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