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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR污染问题
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woa

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR污染问题 已有17人参与

PCR污染问题哪位有比较好的解决方法啊？所有的试剂都重新用新的也还是阴性呈阳性反应啊，有经验的虫子给点建议啊
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1楼 2010-05-07 08:49:05
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
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水～～～～～～～这个你换了没？

枪头，模板，，，，，
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2楼2010-05-07 08:52:28
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woa

木虫 (正式写手)
所有的东西都换过了
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3楼2010-05-07 08:59:46
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sn198651

银虫 (初入文坛)
★ ★
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amisking(金币+1): 2010-05-07 11:45:34
PCR污染主要还是空气中有以前的阳性气溶胶
建议你换个环境做吧

另外一种可能就是你原样品已经污染了
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4楼2010-05-07 09:11:57
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shengwufenzi

金虫 (正式写手)
★
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换个环境试试吧
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5楼2010-05-07 09:42:18
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cavafory

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
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amisking(金币+3):欢迎分享经验！ 2010-05-07 11:45:42
我之前也出现这种状况,建议你重新定引物,并且不要在外面空气中分装,到超净台内分装,将你的实验室通风换气,或者换个环境做 ,我的就是这样解决了的,你的应该也可以
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6楼2010-05-07 09:47:00
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gaiyf

金虫 (正式写手)
重点查看酶，引物，模板，管子
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多看文献，多学知识
7楼2010-05-07 09:55:42
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天气真好

铜虫 (小有名气)
★ ★
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lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~· 2010-05-29 09:09:14
我也出现过这种情况，所有的东西都换了还是污染。你也是刚开始做PCR吧。没有别的原因，不是试剂的问题，是你的操作问题。但是也说不好到底是哪儿个步骤出问题，只是你做几次之后就好了，这个真找不出问题。
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8楼2010-05-09 15:30:18
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xpb2005

银虫 (小有名气)
★ ★
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lstt09nk(金币+1):感谢经验分享~~ 2010-05-29 09:09:56
环境问题，有条件的话先在一个没做过这个基因的房子里配混合体系，然后分装，然后到另一个房子（拿的时候要盖上盖子，或者用个一次性手套盖住），在超净工作台上加模板，P完后检测也不要到配混合体系的房子去跑胶，还有就是每次加完样了用八四消毒液对超净工作台进行消毒。
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9楼2010-05-09 20:01:18
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xiongxiong5900

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
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lstt09nk(金币+3):欢迎多多交流~~ 2010-05-29 09:09:40
环境问题当然有，譬如提取区、扩增区、跑胶区混杂，如果你扩的东西其他人也在扩，空气中会有气溶胶，会造成污染。
配体系、分装、加模板建议在超净台中操作。
以前可疑的试剂都不要再用，换成超纯水去稀释引物，其他的如taqE.DNTP.buffer都用新的。
再不行，一个狠招，我们实验室长期总结出来的，阴性阳性及待测样品的模板都不加了，一律改成相应量的水（水与配体系的水一致），再看，如果干干净净，就说明体系没有问题。之后再找其他问题。
注意这几点普通的PCR应该都没问题。
如果是套式或者逆转率PCR，应当更细致更严格。
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10楼2010-05-11 17:44:42
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