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[交流]
q-PCR总是污染
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最近做q-PCR总是出现污染。本来是打算做最小浓度检测，10倍比稀释到了一定的浓度后就会出现平台，而且，我每次做实验都是有清水对照的，清水对照的Ct值也在30左右，与浓度稀释的平台期差不多。我把所有的东西都换掉，只能维持一次，下一次又是污染。我做实验还是挺小心的，实在是找不出原因了。 请各位大侠帮忙，谢谢。 |
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 QPCR 问题简答 |
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leannele(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+3, 嗯........很厉害的大侠~ 2012-04-09 18:25:59
leannele(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+3, 嗯........很厉害的大侠~ 2012-04-09 18:25:59
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嗯................. 曾有某实验室问过老外这个问题，老外这样答曰，PCR各组分专用，枪头、枪也必需专用，勤换手套，实验服专用，准备模板、PCR体系制备、加样、PCR、结果分析必需分开区域进行，所有管子最好是螺帽式的，不能使用一般的ep管，因为开盖肯定有溅出，同样用前必需短暂离心..........你看看需要多细心吧 看你的情况，可能是交叉或前次PCR产物持续污染（具体叫啥的，好像是Carry-over式污染吧），请严格优化各个步骤，或针对持续污染使用带UDG的Taq酶 祝实验顺利 若有说错请高手指点  |
2楼2012-04-09 17:06:03
3楼2012-04-09 17:13:25
4楼2012-04-09 17:13:54
5楼2012-04-09 17:15:02
6楼2012-04-09 17:15:18
10楼2012-04-09 20:40:58
11楼2012-04-09 23:28:48
starseacow
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12楼2012-04-10 00:28:47
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简单回复
2012-04-09 17:46
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leannele(金币+1): 谢谢参与
2012-04-09 17:46
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leannele(金币+1): 谢谢参与
2012-04-09 17:46
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liuleitcm14楼
2012-04-12 10:08
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leannele(金币+1): 谢谢参与
