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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » q-PCR总是污染
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leannele

金虫 (小有名气)

[交流] q-PCR总是污染

最近做q-PCR总是出现污染。本来是打算做最小浓度检测，10倍比稀释到了一定的浓度后就会出现平台，而且，我每次做实验都是有清水对照的，清水对照的Ct值也在30左右，与浓度稀释的平台期差不多。我把所有的东西都换掉，只能维持一次，下一次又是污染。我做实验还是挺小心的，实在是找不出原因了。请各位大侠帮忙，谢谢。
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1楼 2012-04-09 16:51:58
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我是小纯洁

金虫 (正式写手)
★
leannele(金币+1): 谢谢参与
ct32以上就可以忽律不计了。 另外，不知道你是不是用96孔板，如果是的话，建议你一次可以少做点，做3个样品就行。然后样品和水至少离3个孔以上的距离，这样就可以保证不污染了（即：ct>32）。
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10楼2012-04-09 20:40:58
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atlanticwi

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
leannele(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+3, 嗯........很厉害的大侠~ 2012-04-09 18:25:59
嗯.................
曾有某实验室问过老外这个问题，老外这样答曰，PCR各组分专用，枪头、枪也必需专用，勤换手套，实验服专用，准备模板、PCR体系制备、加样、PCR、结果分析必需分开区域进行，所有管子最好是螺帽式的，不能使用一般的ep管，因为开盖肯定有溅出，同样用前必需短暂离心..........你看看需要多细心吧
看你的情况，可能是交叉或前次PCR产物持续污染（具体叫啥的，好像是Carry-over式污染吧），请严格优化各个步骤，或针对持续污染使用带UDG的Taq酶
祝实验顺利 若有说错请高手指点
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2楼2012-04-09 17:06:03
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leannele

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-04-09 17:06:03:
嗯.................
曾有某实验室问过老外这个问题，老外这样答曰，PCR各组分专用，枪头、枪也必需专用，勤换手套，实验服专用，准备模板、PCR体系制备、加样、PCR、结果分析必需分开区域进行，所有管子最好是螺 ...

刚刚看完大侠在其他帖子的发言，很受益啊。谢谢，谢谢，我打算换ep管，在超净台做实验了。
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3楼2012-04-09 17:13:25
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leannele

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-04-09 17:06:03:
嗯.................
曾有某实验室问过老外这个问题，老外这样答曰，PCR各组分专用，枪头、枪也必需专用，勤换手套，实验服专用，准备模板、PCR体系制备、加样、PCR、结果分析必需分开区域进行，所有管子最好是螺 ...

刚刚看完大侠在其他帖子的发言，很受益啊。谢谢，谢谢，我打算换ep管，在超净台做实验了。
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4楼2012-04-09 17:13:54
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ailingzhihun9楼
2012-04-09 17:46   回复  
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