2楼: Originally posted by terry130 at 2011-11-15 08:08:30:
应该是有第二扩增造成的溶解曲线分离。这样的数据不能用的。你必须得换引物，知道找到合适的位置。。你做的基因组有没有全序列信息？如果有的话应该不难找到一对专一的引物。

3楼: Originally posted by tco_001 at 2011-11-15 16:35:41:
那是不是只要我的溶解曲线的峰时单一的就可以认为我的数据是可用的呢？
不知道在哪里看到说ct值超过30得出的结果就不是很可行了，毕竟qpcr的影响因素太多了

4楼: Originally posted by terry130 at 2011-11-15 18:47:58:
你要理解溶解曲线的含义啊。 他是cycle-signal曲线的导数曲线。一个标准的cycle-signal所对应的溶解曲线就应该是单峰的。这个只是数据可用的必要条件。并不是充分条件。如果你的非特异扩增曲线跟你的特异扩增曲线 ...

5楼: Originally posted by tco_001 at 2011-11-15 21:29:55:
恩，现在我用的是SYBR green，那我如何检查我扩增出来的产物是正确的而不是假阳性的结果呢？琼脂糖电泳试过了，效果不是很好，做northern？还是不用检测？

6楼: Originally posted by terry130 at 2011-11-16 08:49:50:
你做real time PCR摸条件的时候都不跑电泳的吗？？  在确定条件之后要跑一下电泳哦。这是最基本的验证了，必须是背景低，无拖带，条带单一才行。 这个是sybr green法的要求~

1楼: Originally posted by tco_001 at 2011-11-14 21:25:42:
最近在做Q-pcr，要扩增一个表达量很底的mRNA
设计了引物上机去做，溶解曲线不单一有两个峰，一个大一点一个小一点，大一点的应该是产物，但两峰高度差距不算太大，距离倒是蛮远的
扩增曲线测定的Ct值在32左右， ...

7楼: Originally posted by tco_001 at 2011-11-16 16:38:30:
好吧，主要是没人带就自己在那摸索着做，以前也用电泳摸过的，但是觉得reaLtime的条件和普通pcr的条件不是很一样，照搬的话效果不是很好，但是一调整又觉得不确定了，很矛盾的

8楼: Originally posted by apple6299 at 2011-11-16 17:13:10:
做Q-PCR数据好坏与否，首先是引物的设计合不合理，最好是找序列的保守区域进行扩增较好，如果自己设计不好，可以请教别人，如果是TaqMan探针的设计，目前是有公司帮设计的，价格贵蛮多的，看自己实验室的情况了。 ...