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q-PCR总是污染
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leannele
金虫
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虫号: 856606
[交流]
q-PCR总是污染
最近做q-PCR总是出现污染。本来是打算做最小浓度检测,10倍比稀释到了一定的浓度后就会出现平台,而且,我每次做实验都是有清水对照的,清水对照的Ct值也在30左右,与浓度稀释的平台期差不多。我把所有的东西都换掉,只能维持一次,下一次又是污染。我做实验还是挺小心的,实在是找不出原因了。
请各位大侠帮忙,谢谢。
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1楼
2012-04-09 16:51:58
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atlanticwi
金虫
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leannele(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+3, 嗯........很厉害的大侠~
2012-04-09 18:25:59
嗯.................
曾有某实验室问过老外这个问题,老外这样答曰,PCR各组分专用,枪头、枪也必需专用,勤换手套,实验服专用,准备模板、PCR体系制备、加样、PCR、结果分析必需分开区域进行,所有管子最好是螺帽式的,不能使用一般的ep管,因为开盖肯定有溅出,同样用前必需短暂离心..........你看看需要多细心吧
看你的情况,可能是交叉或前次PCR产物持续污染(具体叫啥的,好像是Carry-over式污染吧),请严格优化各个步骤,或针对持续污染使用带UDG的Taq酶
祝实验顺利 若有说错请高手指点
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2楼
2012-04-09 17:06:03
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