24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

leannele

金虫 (小有名气)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 463.4
帖子: 285
在线: 75.5小时
虫号: 856606

[交流] q-PCR总是污染

最近做q-PCR总是出现污染。本来是打算做最小浓度检测，10倍比稀释到了一定的浓度后就会出现平台，而且，我每次做实验都是有清水对照的，清水对照的Ct值也在30左右，与浓度稀释的平台期差不多。我把所有的东西都换掉，只能维持一次，下一次又是污染。我做实验还是挺小心的，实在是找不出原因了。

请各位大侠帮忙，谢谢。

回复此楼

» 抢金币啦！回帖就可以得到:
查看全部散金贴

1楼2012-04-09 16:51:58

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

leannele

金虫 (小有名气)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 463.4
帖子: 285
在线: 75.5小时
虫号: 856606

引用回帖:

2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-04-09 17:06:03:
嗯.................
曾有某实验室问过老外这个问题，老外这样答曰，PCR各组分专用，枪头、枪也必需专用，勤换手套，实验服专用，准备模板、PCR体系制备、加样、PCR、结果分析必需分开区域进行，所有管子最好是螺 ...

刚刚看完大侠在其他帖子的发言，很受益啊。谢谢，谢谢，我打算换ep管，在超净台做实验了。

赞一下

回复此楼

5楼2012-04-09 17:15:02

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

查看全部 15 个回答

atlanticwi

金虫 (正式写手)

MolEPI: 25
应助: 138 (高中生)
金币: 141.2
帖子: 536
在线: 313.2小时
虫号: 1099992

★ ★ ★ ★
leannele(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+3, 嗯........很厉害的大侠~ 2012-04-09 18:25:59

嗯.................
曾有某实验室问过老外这个问题，老外这样答曰，PCR各组分专用，枪头、枪也必需专用，勤换手套，实验服专用，准备模板、PCR体系制备、加样、PCR、结果分析必需分开区域进行，所有管子最好是螺帽式的，不能使用一般的ep管，因为开盖肯定有溅出，同样用前必需短暂离心..........你看看需要多细心吧
看你的情况，可能是交叉或前次PCR产物持续污染（具体叫啥的，好像是Carry-over式污染吧），请严格优化各个步骤，或针对持续污染使用带UDG的Taq酶
祝实验顺利若有说错请高手指点