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woa

木虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】PCR污染问题已有17人参与

PCR污染问题哪位有比较好的解决方法啊？所有的试剂都重新用新的也还是阴性呈阳性反应啊，有经验的虫子给点建议啊

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1楼 2010-05-07 08:49:05

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

xiongxiong5900

木虫 (小有名气)

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★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):欢迎多多交流~~ 2010-05-29 09:09:40

环境问题当然有，譬如提取区、扩增区、跑胶区混杂，如果你扩的东西其他人也在扩，空气中会有气溶胶，会造成污染。
配体系、分装、加模板建议在超净台中操作。
以前可疑的试剂都不要再用，换成超纯水去稀释引物，其他的如taqE.DNTP.buffer都用新的。
再不行，一个狠招，我们实验室长期总结出来的，阴性阳性及待测样品的模板都不加了，一律改成相应量的水（水与配体系的水一致），再看，如果干干净净，就说明体系没有问题。之后再找其他问题。
注意这几点普通的PCR应该都没问题。
如果是套式或者逆转率PCR，应当更细致更严格。