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xiaomuxiaoma

铁虫 (小有名气)

[求助] pcr污染怎么办?

这样pcr出来的结果是试剂污染了吗?应该怎样排查是哪种试剂污染了啊?

原来的pcr体系受到了污染,不加模板也能扩出来,先设计一实验,想确定是那种成分受到了污染。
2-6号为分别使用原来的buffer,Mg2+,dNTP,primer1,primer2中的一种,其他的四种成分都用新的,酶都还是用原来的,体系中不加模板,扩出的结果
7号为加了模板,扩出来正常,
8号为用购买的pcr mix(buffer,mg2+,dNTP,Taq预混好)加primer1,primer2,不加模板扩出来的。
目标片段283bp
marker条带分别为1200,900,750,600,450,300,150
H2O也是另换的一瓶水。
各位帮忙分析一下,这可能是什么被污染了?
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太极拳

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-13 18:37:57
个人认为是水有问题,即便是新引物,也是用水稀释后得到的。或是周围空气中有此基因。可以换其他实验室的水试试
2楼2012-04-13 15:33:42
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zgb1982

木虫 (正式写手)

我这两天也遇到PCR污染的问题,也没找到具体的污染源,不过觉得应该是引物的问题,也是用的商品化的PCRMIX,今天不加模板扩了五个,四个都有条带,有一个还特别亮,有一个没条带,很是奇怪.
3楼2012-04-13 15:39:29
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-13 18:38:21
xiaomuxiaoma: 金币+1, 有帮助 2012-04-17 10:50:07
我实验室也遇到这种情况,也像你一样把BUffer,酶,水都换了发现没解决,最后发现是枪的问题,建议你去其他实验室(不做你那基因的),用人家的所有东西,别用自己的,估计就OK了。移液枪吸液时注意不要让液体误吸到枪体里,能清理的话隔一段时间用酒精洗一下。实验室做长了这种实验也会形成气溶胶,说不定就会跑到你的PCR体系里,建议这种易污染的实验在无菌操作台里操作。
希望能帮到你,祝实验顺利!
hehe
4楼2012-04-13 17:06:53
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polo_lai

新虫 (初入文坛)

气溶胶污染应该7号也能出来150bp以下的片段,我感觉是Primer浓度高了?!~要不就电压的问题或胶不均匀!~
将爱进行到底
5楼2017-11-21 12:02:04
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