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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR污染判定
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wjjw1104

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】PCR污染判定 已有15人参与

在阴性对照中扩出产物，所以这几天一直在寻找污染源，从引物到体系全部更换后，依然存在，于是我怀疑是枪的问题，用别人的枪做仍然能扩出条带，今天我又用了别人的酶做，因为我怀疑我们这批酶有问题，结果却是有模板和水都扩不出东西，且引物二聚体很亮，这是不是酶的特异性太差。
此外我还怀疑水有问题，我们的水是国产机器产出的纯净水，然后在自己灭菌一次。

情况就是这样，请各位指教
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1楼 2010-04-13 23:03:08
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zhongy1985

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

最近我也老是遇到这样的问题，一直没有找到污染源，很是苦恼啊！
期待高手指教！
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2楼2010-04-13 23:10:10
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zrm1983

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1): 2010-04-17 19:00
可以把loading buffer 换了试试
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3楼2010-04-17 11:09:43
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leon198418029

金虫 (小有名气)

research associate
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+3):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-17 19:00
引用回帖:
Originally posted by wjjw1104 at 2010-04-13 23:03:08:
在阴性对照中扩出产物，所以这几天一直在寻找污染源，从引物到体系全部更换后，依然存在，于是我怀疑是枪的问题，用别人的枪做仍然能扩出条带，今天我又用了别人的酶做，因为我怀疑我们这批酶有问题，结果却是有模 ...

楼主莫慌，可以尝试用百分之十的次氯酸钠擦拭实验桌面以及枪等，然后换用新的试剂盒，并将其与DNA分开放置。以后做实验小心一点，不要造成液体飞溅等等。试试吧，祝好运！
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不忘初心，为梦远行。
4楼2010-04-17 17:58:17
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+3):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-17 19:00
污染，一般情况就是水，尤其像楼主说的，所有药都排查了，就是水最值得怀疑，国产水倒是问题不大，但是要常换常灭菌，而且瓶子一定要干净，用次氯酸钠泡好才行，另外，灭好的水最好超净台分装使用，不要总是开瓶用。

不知道楼主的模板是什么，细菌病毒质粒等，有的时候是空气污染
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5楼2010-04-17 18:19:19
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moonblue789

金虫 (小有名气)
★
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会不会LZ的引物有问题，你看看引物合成纯化方式
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6楼2010-04-22 17:21:19
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gn2003_0

金虫 (小有名气)
环境污染问题一般不大，我们做有时候都不在超净工作台。最有可能是你的水的问题，或者PCR反应体系中的成分有污染。
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7楼2010-04-23 14:44:52
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hyde0706

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不知道你PCR产物检测区和操作区是否严格区分，产物积累到一定浓度，会在空气中形成气溶胶，一个气溶胶颗粒可以包含1000个copies的产物，还是可以形成污染的。
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8楼2010-04-23 16:38:10
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sinoer

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
水的问题不是很大，还是从别的方面找原因
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9楼2010-04-23 16:42:00
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lliuzhi

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我觉得你可以换一下酶，我之前P的就没有我需要的条带，反而引物二聚体特别亮，后来换了酶就好了
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10楼2010-04-23 19:28:20
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