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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR污染判定
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馨沁

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
也存在此问题，正分析原因
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11楼2010-04-23 19:45:52
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shuwenying

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+3):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-24 00:35
是的，我们实验室以前也出现过类似的问题，大家也是换了各种试剂、甚至还装了紫外灯消毒什么的，都不行。
后来有个老师从国外回来的，也曾经遇见这种问题，国外的老板告诉她这是环境的问题，大家在同一个地方做的多了，气溶胶会污染环境的，一般来说没有什么办法，只能等几个月再做，就没事了。我们实验室也是这样的，等了将近三个月大家都不做，居然就莫名其妙地正常了。
你的实验急不急？要不然就安排实验室的人先做其他方面的实验，PCR就等1个月试试？
以上意见仅供参考啊
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12楼2010-04-23 22:54:02
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zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上
楼主是扩小片段么？小片段最容易被空气污染了，换个地方做试试。
我有一次检测克隆【500bp】也是假阳性，换了很多东西都不好，还洗了菌体之后再做菌落PCR。又以为是引物特异性不够好。郁闷的放了一个星期，然后就正常了
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终于熬成木虫了……
13楼2010-04-24 06:41:20
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xpb2005

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by shuwenying at 2010-04-23 22:54:02:
是的，我们实验室以前也出现过类似的问题，大家也是换了各种试剂、甚至还装了紫外灯消毒什么的，都不行。
后来有个老师从国外回来的，也曾经遇见这种问题，国外的老板告诉她这是环境的问题，大家在同一个地方做的 ...

同意这种见解，环境问题最值得怀疑，你如果P完后放在同一个实验室跑胶，肯定要开盖检测，开盖时就有可能形成含有模板的气溶胶，做的次数多了就会把阴性模板污染，做出假阳性的结果。
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14楼2010-04-24 15:35:24
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xpb2005

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
建议你先将超净工作台搽干净，用紫外灯照照，完了再超净工作台上配混合体系，加样时在台子外面加，如果检测能放在另一个房间最好。每次做完实验微升一定要搞好。
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15楼2010-04-24 15:50:28
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gaiyf

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
楼主是否检查了PCR管呢？pcr出现污染是很麻烦的事情，所以为了检验到底是什么出问题了，要一项一项的去排除，当初我就是为了解决污染的问题，足足进行了将近一个周的实验。
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多看文献，多学知识
16楼2010-04-24 16:17:32
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yangzi0224

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by yujiaping1 at 2010-04-17 18:19:19:
污染，一般情况就是水，尤其像楼主说的，所有药都排查了，就是水最值得怀疑，国产水倒是问题不大，但是要常换常灭菌，而且瓶子一定要干净，用次氯酸钠泡好才行，另外，灭好的水最好超净台分装使用，不要总是开瓶用 ...

我们最近也有污染，最终怀疑到水，可是没有加水的空白对照可扩出，加过阴性对照模板的没有扩出，有些样品也扩不出，你说怎么解释呢？如果是水所有样品都能扩出，可是有些扩不出怎么说呢？很郁闷
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17楼2012-02-29 18:07:11
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yangzi0224

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by gaiyf at 2010-04-24 16:17:32:
楼主是否检查了PCR管呢？pcr出现污染是很麻烦的事情，所以为了检验到底是什么出问题了，要一项一项的去排除，当初我就是为了解决污染的问题，足足进行了将近一个周的实验。

那16楼最终排除的结果是什么呢？
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18楼2012-02-29 18:08:12
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wjjw1104

新虫 (初入文坛)
都毕业了
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19楼2013-10-11 12:15:36
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