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wjjw1104

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】PCR污染判定 已有15人参与

在阴性对照中扩出产物,所以这几天一直在寻找污染源,从引物到体系全部更换后,依然存在,于是我怀疑是枪的问题,用别人的枪做仍然能扩出条带,今天我又用了别人的酶做,因为我怀疑我们这批酶有问题,结果却是有模板和水都扩不出东西,且引物二聚体很亮,这是不是酶的特异性太差。
此外我还怀疑水有问题,我们的水是国产机器产出的纯净水,然后在自己灭菌一次。

情况就是这样,请各位指教
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zhongy1985

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流

最近我也老是遇到这样的问题,一直没有找到污染源,很是苦恼啊!
期待高手指教!
2楼2010-04-13 23:10:10
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zrm1983

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1): 2010-04-17 19:00
可以把loading buffer 换了试试
3楼2010-04-17 11:09:43
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leon198418029

金虫 (小有名气)

research associate

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+3):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-04-17 19:00
引用回帖:
Originally posted by wjjw1104 at 2010-04-13 23:03:08:
在阴性对照中扩出产物,所以这几天一直在寻找污染源,从引物到体系全部更换后,依然存在,于是我怀疑是枪的问题,用别人的枪做仍然能扩出条带,今天我又用了别人的酶做,因为我怀疑我们这批酶有问题,结果却是有模 ...

楼主莫慌,可以尝试用百分之十的次氯酸钠擦拭实验桌面以及枪等,然后换用新的试剂盒,并将其与DNA分开放置。以后做实验小心一点,不要造成液体飞溅等等。试试吧,祝好运!
不忘初心,为梦远行。
4楼2010-04-17 17:58:17
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+3):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-04-17 19:00
污染,一般情况就是水,尤其像楼主说的,所有药都排查了,就是水最值得怀疑,国产水倒是问题不大,但是要常换常灭菌,而且瓶子一定要干净,用次氯酸钠泡好才行,另外,灭好的水最好超净台分装使用,不要总是开瓶用。

不知道楼主的模板是什么,细菌病毒质粒等,有的时候是空气污染
5楼2010-04-17 18:19:19
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moonblue789

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
会不会LZ的引物有问题,你看看引物合成纯化方式
6楼2010-04-22 17:21:19
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gn2003_0

金虫 (小有名气)

环境污染问题一般不大,我们做有时候都不在超净工作台。最有可能是你的水的问题,或者PCR反应体系中的成分有污染。
7楼2010-04-23 14:44:52
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hyde0706

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不知道你PCR产物检测区和操作区是否严格区分,产物积累到一定浓度,会在空气中形成气溶胶,一个气溶胶颗粒可以包含1000个copies的产物,还是可以形成污染的。
8楼2010-04-23 16:38:10
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sinoer

铜虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
水的问题不是很大,还是从别的方面找原因
9楼2010-04-23 16:42:00
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lliuzhi

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我觉得你可以换一下酶,我之前P的就没有我需要的条带,反而引物二聚体特别亮,后来换了酶就好了
10楼2010-04-23 19:28:20
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