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xiaomuxiaoma

铁虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
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[求助] pcr污染怎么办？

这样pcr出来的结果是试剂污染了吗？应该怎样排查是哪种试剂污染了啊？

原来的pcr体系受到了污染，不加模板也能扩出来，先设计一实验，想确定是那种成分受到了污染。
2-6号为分别使用原来的buffer，Mg2+，dNTP，primer1,primer2中的一种，其他的四种成分都用新的，酶都还是用原来的，体系中不加模板，扩出的结果
7号为加了模板，扩出来正常，
8号为用购买的pcr mix（buffer，mg2+,dNTP，Taq预混好）加primer1，primer2，不加模板扩出来的。
目标片段283bp
marker条带分别为1200,900，750,600,450,300,150
H2O也是另换的一瓶水。
各位帮忙分析一下，这可能是什么被污染了？

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1楼 2012-04-13 15:06:56

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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-13 18:38:21
xiaomuxiaoma: 金币+1, ★有帮助 2012-04-17 10:50:07

我实验室也遇到这种情况，也像你一样把BUffer，酶，水都换了发现没解决，最后发现是枪的问题，建议你去其他实验室(不做你那基因的),用人家的所有东西，别用自己的，估计就OK了。移液枪吸液时注意不要让液体误吸到枪体里，能清理的话隔一段时间用酒精洗一下。实验室做长了这种实验也会形成气溶胶，说不定就会跑到你的PCR体系里，建议这种易污染的实验在无菌操作台里操作。
希望能帮到你，祝实验顺利！