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lhm_hnyj金虫 (小有名气)
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【求助/交流】PCR效果问题 已有6人参与
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小虫最近用昆虫COII的通用引物对一批一个样本进行了扩增（基因组之前用cytb、COI通用引物分别进行了扩增，效果不错），25ul体系：10*buffer2.5ul，2.5mMdNTP2ul，10UM引物各0.5ul，taq酶1U，模板与之前扩cytb等一致，0.5ul； 退火温度分别采用了46-52度梯度，另外还采用了文献方法，先46度退火6个循环，再52度30循环（不知道是什么原理），结果电泳效果大家都一致，均为较弱的涂抹带。大家能帮忙分析分析可能是哪方面的问题吗？有没有可能得到改进呢  图片右起依次为DL2000marker，空白，46、48、50、52退火及两步退火产物 |
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我又提高温度跑了梯度，还是涂抹带，同时用了另一对引物，那对引物出了亮带
10楼2010-12-13 20:05:25