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sejorn

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】求助,关于荧光定量PCR问题 已有4人参与

本人用Taqman的荧光定量PCR方法测细菌总量,使用的探针是Takara公司合成的,PCR反应体系采用上海生工的taqman试剂盒。使用的标准质粒的浓度范围为:4.9*10~4.9*107copies/ul,做出来的标准曲线效果很差,荧光信号比较弱,曲线很乱。请教高手,是什么原因造成的呢?不知怎改进……谢谢啦!



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love_st

金虫 (著名写手)


★ ★
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scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-12-22 23:15:49
这个都没有典型的扩增曲线,看在component图形有没有扩增
2楼2010-12-22 16:06:22
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biolinkphila

新虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-12-22 23:15:55
efficency 太高了,是不是非特异性扩增啊,一般应该在0.9~1.05比较好吧,|R|>99%,线性才算好。
3楼2010-12-22 16:30:58
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sejorn

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by biolinkphila at 2010-12-22 16:30:58:
efficency 太高了,是不是非特异性扩增啊,一般应该在0.9~1.05比较好吧,|R|>99%,线性才算好。

你好!我是第一次做这个,对定量PCR的了解还很浅。efficency太高,可能是哪些原因造成的呢?定量PCR的非特异性扩增,可以从哪些方面进行改进呢?谢谢啊!我采用的反应条件是Taqman试剂盒里的条件,94度 4min,接着40cyclers(94度30秒,60度60秒)。
4楼2010-12-22 20:54:58
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sejorn

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by love_st at 2010-12-22 16:06:22:
这个都没有典型的扩增曲线,看在component图形有没有扩增

你好!我是初次接解这个PCR实验,弱弱的问一句,“component图形”是什么呢?我也感觉没有那种从上升到保持不变的典型扩增曲线。但都不知是什么原因,不知道从哪里下手,作改进?谢谢啊!
5楼2010-12-22 21:02:24
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fangjun1986

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by sejorn at 2010-12-22 21:02:24:


你好!我是初次接解这个PCR实验,弱弱的问一句,“component图形”是什么呢?我也感觉没有那种从上升到保持不变的典型扩增曲线。但都不知是什么原因,不知道从哪里下手,作改进?谢谢啊!

component图形,就在你看结果的那个窗口里,你打开看看就可以了
6楼2011-01-05 14:31:30
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