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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助，关于荧光定量PCR问题
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sejorn

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】求助，关于荧光定量PCR问题 已有4人参与

本人用Taqman的荧光定量PCR方法测细菌总量，使用的探针是Takara公司合成的，PCR反应体系采用上海生工的taqman试剂盒。使用的标准质粒的浓度范围为：4.9*10~4.9*107copies/ul，做出来的标准曲线效果很差，荧光信号比较弱，曲线很乱。请教高手，是什么原因造成的呢？不知怎改进……谢谢啦！
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1楼 2010-12-22 15:45:39
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biolinkphila

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-12-22 23:15:55
efficency 太高了，是不是非特异性扩增啊，一般应该在0.9~1.05比较好吧，|R|>99%，线性才算好。
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3楼2010-12-22 16:30:58
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love_st

金虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-12-22 23:15:49
这个都没有典型的扩增曲线，看在component图形有没有扩增
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2楼2010-12-22 16:06:22
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sejorn

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by biolinkphila at 2010-12-22 16:30:58:
efficency 太高了，是不是非特异性扩增啊，一般应该在0.9~1.05比较好吧，|R|>99%，线性才算好。

你好！我是第一次做这个，对定量PCR的了解还很浅。efficency太高，可能是哪些原因造成的呢？定量PCR的非特异性扩增，可以从哪些方面进行改进呢？谢谢啊！我采用的反应条件是Taqman试剂盒里的条件，94度 4min，接着40cyclers(94度30秒,60度60秒)。
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4楼2010-12-22 20:54:58
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sejorn

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by love_st at 2010-12-22 16:06:22:
这个都没有典型的扩增曲线，看在component图形有没有扩增

你好！我是初次接解这个PCR实验，弱弱的问一句，“component图形”是什么呢？我也感觉没有那种从上升到保持不变的典型扩增曲线。但都不知是什么原因，不知道从哪里下手，作改进？谢谢啊！
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5楼2010-12-22 21:02:24
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