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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量Pcr问题求助
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好好后生

金虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量Pcr问题求助 已有1人参与

我做了荧光定量pcr ，采用delta delta CT 法，需要用两板，有内参β-actin ，还有目的基因clock，定量仪器的阈值是自动生成的  1在同一板上，仪器生成两条阈值，分别是所有不同样的内参基因的阈值和所有不同样clock基因的阈值，这两个阈值线为什么不在同一条水平线上，会影响结果吗 2 在另一个板上，也是内参基因β-actin和所有不同样clock基因，阈值也是不同的，如果我要比较这两板的目的基因的clock相对水平，阈值线需要重调吗，怎么调合适，因为我发现在两板上仪器自动生成的阈值线是有差异的，并且如果有一个空跑的不好，阈值线会发生比较大的变化
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1楼 2014-05-31 09:15:32
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
好好后生(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-31 15:30:03
好好后生: 金币+50, ★有帮助, 虽然没解决问题，还是感谢 2014-06-04 11:09:21
只要同一批PCR中同种基因的样品阈值相同就行
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2楼2014-05-31 12:18:43
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好好后生

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-05-31 12:18:43
只要同一批PCR中同种基因的样品阈值相同就行

因为目的基因需要分两板做，那请问两批PCR阈值怎么设定，任然根据软件自动生成似乎不对，比方说有一个内参基因的孔出错了，平台期很低，导致全部的内参基因阈值都压低了，这好像需要手动调整，这样怎么调整才能保持两板之间的误差减少
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3楼2014-05-31 13:56:29
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 好好后生 at 2014-05-31 13:56:29
因为目的基因需要分两板做，那请问两批PCR阈值怎么设定，任然根据软件自动生成似乎不对，比方说有一个内参基因的孔出错了，平台期很低，导致全部的内参基因阈值都压低了，这好像需要手动调整，这样怎么调整才能保持 ...

手动设定
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4楼2014-05-31 14:24:55
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好好后生

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-05-31 14:24:55
手动设定...

请问两板之间的阈值怎么设定才能误差比较小，我知道同一批次的荧光定量目的基因和内参基因的阈值可以不一样，但是两板之间，我是否需要把目的基因和内参基因阈值调成同一水平，这两板的结果才能比较？
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5楼2014-05-31 15:27:52
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 好好后生 at 2014-05-31 15:27:52
请问两板之间的阈值怎么设定才能误差比较小，我知道同一批次的荧光定量目的基因和内参基因的阈值可以不一样，但是两板之间，我是否需要把目的基因和内参基因阈值调成同一水平，这两板的结果才能比较？...

直接输数字
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6楼2014-05-31 17:06:15
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好好后生

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-05-31 17:06:15
直接输数字...

您的意思是把两板的内参基因阈值都调成同一数值，目的基因阈值也调成同一数值，内参和目的基因的阈值可以不一样，对吗？
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7楼2014-05-31 21:44:03
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 好好后生 at 2014-05-31 21:44:03
您的意思是把两板的内参基因阈值都调成同一数值，目的基因阈值也调成同一数值，内参和目的基因的阈值可以不一样，对吗？...

嗯
8楼2014-06-03 08:43:03
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