| 查看: 3109 | 回复: 11 | ||
crazymouse66金虫 (正式写手)
|
[求助]
相对荧光定量PCR
|
各位虫友，麻烦大家帮我看一下，我做的试试荧光定量PCR，其中溶解曲线都还可以，但是扩增曲线为什么会出现那种情况呢？真的不是很明白，请大家指导一下。其中我做了60个循环，里面初始的cDNA含量是9ng。 扩增曲线.jpg  溶解曲线.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有287人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有7人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 荧光定量pcr,以及内参基因的选择。
已经有4人回复
- 绝对定量荧光PCR中做标准曲线的DNA的获得。
已经有10人回复
- 荧光定量PCR与普通PCR
已经有12人回复
- 荧光定量PCR-绝对定量
已经有4人回复
- 求助荧光定量PCR统计方法
已经有7人回复
- 荧光定量PCR扩增效率低
已经有16人回复
- 荧光定量PCR结果如何处理
已经有12人回复
- 荧光定量pcr溶解曲线好几个峰，但是电泳只有一条目的条带，怎么回事
已经有5人回复
- 荧光定量PCR ，条件优化
已经有13人回复
- 有做过荧光定量PCR的吗？
已经有9人回复
- 荧光定量PCR实验技术
已经有15人回复
- 相对定量荧光PCR结果分析中的SD如何计算？
已经有7人回复
- 荧光定量PCR，是相对定量相关问题请教。
已经有4人回复
- 荧光定量PCR。。。求助求助
已经有17人回复
- 荧光定量PCR
已经有12人回复
- 荧光定量PCR的模板浓度
已经有12人回复
- 荧光定量PCR标准曲线的建立
已经有3人回复
- 荧光定量PCR扩增效率怎么做？？？？我要被逼疯了
已经有17人回复
- 荧光定量PCR cDNA怎么定量啊？
已经有12人回复
- 相对定量PCR求助
已经有16人回复
- 荧光定量PCR与普通PCR产物不一样？
已经有6人回复
- 荧光定量PCR(相对定量)的分析结果2-△△Ct怎么看呀?
已经有31人回复
- 【求助】我这叫什么PCR呢？
已经有5人回复
- 【求助/交流】相对荧光定量pcr检测基因表达差异问题
已经有8人回复
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖应助！ 2013-07-03 02:11:05
crazymouse66: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-07-09 08:39:30
crazymouse66: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢你的建议 2013-07-09 08:41:32
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖应助！ 2013-07-03 02:11:05
crazymouse66: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-07-09 08:39:30
crazymouse66: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢你的建议 2013-07-09 08:41:32
| 做60个循环也太多了吧。我怀疑你扩增的是什么。一般定量PCR的程序跑40或者45个循环。CT的最佳范围是15-30。你的熔解曲线好像也有问题。熔解温度太低，一般产物峰的熔解温度在80°C以上，七十多度的一般都是引物二聚体。你扩增的是用RNA反转录得到的第一链cDNA吗？ |
2楼2013-07-03 00:21:23
crazymouse66
金虫 (正式写手)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 3657.7
- 散金: 140
- 红花: 4
- 帖子: 551
- 在线: 112.6小时
- 虫号: 1441792
- 注册: 2011-10-14
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2013-07-03 08:48:09
4楼2013-07-03 08:56:56
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-07-03 10:40:29
crazymouse66: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-07-09 08:40:16
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-07-03 10:40:29
crazymouse66: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-07-09 08:40:16
|
在PCR过程中，常可见到循环次数到底应为多少的问题。简单计算就明白了。30循环，产物扩增量为2^30，近似为10^9， 如果用1000个模板分子，则PCR后，总量为 1000*10^9=10^12, 其摩尔数=10^12/6.02*10^23=1.6*10^(-12)=1pmol 如果你的片段为200nt, 则PCR后的产物量=分子量*摩尔数=200*660*1.6*10^(-12)g=0.2*10^(-6)g=0.2ug 由此，可以看到正常PCR的扩增效率。 另： PCR是，你的引物总量是？ 40个循环、50个循环、60个循环需要消耗多少引物？ 我就不细算了。 因此请各位做PCR时，最好计算一下 |
5楼2013-07-03 09:28:48
crazymouse66
金虫 (正式写手)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 3657.7
- 散金: 140
- 红花: 4
- 帖子: 551
- 在线: 112.6小时
- 虫号: 1441792
- 注册: 2011-10-14
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
6楼2013-07-03 10:04:25
crazymouse66
金虫 (正式写手)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 3657.7
- 散金: 140
- 红花: 4
- 帖子: 551
- 在线: 112.6小时
- 虫号: 1441792
- 注册: 2011-10-14
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
7楼2013-07-03 10:06:25
zhouking8758
木虫 (正式写手)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 2140
- 散金: 27
- 红花: 2
- 帖子: 369
- 在线: 291.4小时
- 虫号: 691834
- 注册: 2009-01-12
- 专业: 生物大分子结构与功能
8楼2013-07-03 10:24:46
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
9楼2013-07-03 23:15:31
10楼2013-07-03 23:25:22
