24小时热门版块排行榜    

查看: 2642  |  回复: 8

chendarid0

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】相对荧光定量pcr检测基因表达差异问题 已有4人参与

请高手不吝赐教 万分感谢
我是用荧光定量pcr仪来测定β微管蛋白在不同组织不同处理方式不同时段基因表达差异,以β-actin为内参。有对照,经过微孢子虫感染的和微孢子虫感染后又加药物治疗的三种处理方式。
那我使用Taq-man探针来做还是SYBR-green荧光染料来做
我在分析数据时一般用相对标准曲线法还是2-△△t法呢  
还有标准曲线法是怎么回事 怎么操作的
谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

三人行必有我师
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chendarid0

银虫 (初入文坛)

请大家帮帮忙啊

引用回帖:
Originally posted by chendarid0 at 2010-08-23 15:48:47:
请高手不吝赐教 万分感谢
我是用荧光定量pcr仪来测定β微管蛋白在不同组织不同处理方式不同时段基因表达差异,以β-actin为内参。有对照,经过微孢子虫感染的和微孢子虫感染后又加药物治疗的三种处理方式。
那我 ...

请各位高手帮帮忙啊 我这个帖子就快石沉大海啦 万分感谢你的指点
三人行必有我师
2楼2010-08-26 16:18:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看你的经费吧。taqman效果稍好,但探针很贵~
3楼2010-08-26 18:00:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chendarid0

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-08-26 18:00:52:
看你的经费吧。taqman效果稍好,但探针很贵~

谢谢您的指点,请问我是用双标准曲线还是2-△△t法来测定相对基因表达差异呢? 双标准曲线法是怎么操作的呢 谢谢
三人行必有我师
4楼2010-08-27 11:18:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by chendarid0 at 2010-08-27 11:18:59:


谢谢您的指点,请问我是用双标准曲线还是2-△△t法来测定相对基因表达差异呢? 双标准曲线法是怎么操作的呢 谢谢

这个说来话长,主要还是设计一个扩增效率问题,你需要事先做预实验,看一下扩增效率

第一种方法就需要扩增效率都非常好,
第二种不受影响,但是需要做两套标准曲线,所以是双标准曲线(目标和内参),所以就费钱
5楼2010-08-27 11:42:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)

建议先用sybr先做,毕竟探针价格高,用普通pcr优化好扩增条件
6楼2010-08-27 13:41:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chendarid0

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-08-27 11:42:02:


这个说来话长,主要还是设计一个扩增效率问题,你需要事先做预实验,看一下扩增效率

第一种方法就需要扩增效率都非常好,
第二种不受影响,但是需要做两套标准曲线,所以是双标准曲线(目标和内参),所以 ...

谢谢你的回复
三人行必有我师
7楼2010-08-28 14:08:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chendarid0

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-08-27 13:41:13:
建议先用sybr先做,毕竟探针价格高,用普通pcr优化好扩增条件

谢谢你的回复啊
三人行必有我师
8楼2010-08-28 14:08:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

伊依雪儿

银虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
建议用2-△△t法来测定相对基因表达差异来做,我们实验室都是这么做了,也比较受认可
9楼2012-12-18 17:49:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 chendarid0 的主题更新
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 4/200 2026-11-10 19:50 by Z7qfCsdIiD1T
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 5/250 2026-11-10 19:45 by Z7qfCsdIiD1T
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 4/200 2026-11-10 19:39 by Z7qfCsdIiD1T
[考博] 申请环境,微生物方向博士 +3 浅笑09 2026-11-08 3/150 2026-11-10 12:44 by 可淡不可忘
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 4/200 2026-11-10 12:19 by C6CRn66RYYXS
[考研] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 4/200 2026-11-10 11:46 by YHiw1gou1Eda
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”:确已离世,正核实举报内容 +4 yexuqing 2026-11-04 6/300 2026-11-10 11:13 by susizheng
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 4/200 2026-11-10 10:51 by YHiw1gou1Eda
[文学芳草园] 厉娜 +3 张丹枫1991 2026-11-09 5/250 2026-11-09 16:53 by 张丹枫1991
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 11:52 by GwrQVVR6Oenx
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 16/800 2026-11-09 11:47 by GwrQVVR6Oenx
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 15/750 2026-11-09 11:41 by GwrQVVR6Oenx
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 10/500 2026-11-09 08:00 by IhnEQauGmT3K
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 12/600 2026-11-09 06:32 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-08 23:01 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 22:46 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
信息提示
请填处理意见