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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】相对荧光定量pcr检测基因表达差异问题
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chendarid0

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】相对荧光定量pcr检测基因表达差异问题 已有4人参与

请高手不吝赐教 万分感谢
我是用荧光定量pcr仪来测定β微管蛋白在不同组织不同处理方式不同时段基因表达差异，以β-actin为内参。有对照，经过微孢子虫感染的和微孢子虫感染后又加药物治疗的三种处理方式。
那我使用Taq-man探针来做还是SYBR-green荧光染料来做
我在分析数据时一般用相对标准曲线法还是2-△△t法呢  
还有标准曲线法是怎么回事 怎么操作的
谢谢
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三人行必有我师
1楼 2010-08-23 15:48:47
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chendarid0

银虫 (初入文坛)

请大家帮帮忙啊

引用回帖:
Originally posted by chendarid0 at 2010-08-23 15:48:47:
请高手不吝赐教 万分感谢
我是用荧光定量pcr仪来测定β微管蛋白在不同组织不同处理方式不同时段基因表达差异，以β-actin为内参。有对照，经过微孢子虫感染的和微孢子虫感染后又加药物治疗的三种处理方式。
那我 ...

请各位高手帮帮忙啊 我这个帖子就快石沉大海啦 万分感谢你的指点
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三人行必有我师
2楼2010-08-26 16:18:30
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silicare

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★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看你的经费吧。taqman效果稍好，但探针很贵~
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3楼2010-08-26 18:00:52
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chendarid0

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-08-26 18:00:52:
看你的经费吧。taqman效果稍好，但探针很贵~

谢谢您的指点，请问我是用双标准曲线还是2-△△t法来测定相对基因表达差异呢？ 双标准曲线法是怎么操作的呢 谢谢
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三人行必有我师
4楼2010-08-27 11:18:59
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silicare

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
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Originally posted by chendarid0 at 2010-08-27 11:18:59:


谢谢您的指点，请问我是用双标准曲线还是2-△△t法来测定相对基因表达差异呢？ 双标准曲线法是怎么操作的呢 谢谢

这个说来话长，主要还是设计一个扩增效率问题，你需要事先做预实验，看一下扩增效率

第一种方法就需要扩增效率都非常好，
第二种不受影响，但是需要做两套标准曲线，所以是双标准曲线（目标和内参），所以就费钱
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5楼2010-08-27 11:42:02
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jasco

木虫 (正式写手)
建议先用sybr先做，毕竟探针价格高，用普通pcr优化好扩增条件
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6楼2010-08-27 13:41:13
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chendarid0

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by silicare at 2010-08-27 11:42:02:


这个说来话长，主要还是设计一个扩增效率问题，你需要事先做预实验，看一下扩增效率

第一种方法就需要扩增效率都非常好，
第二种不受影响，但是需要做两套标准曲线，所以是双标准曲线（目标和内参），所以 ...

谢谢你的回复
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三人行必有我师
7楼2010-08-28 14:08:13
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chendarid0

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-08-27 13:41:13:
建议先用sybr先做，毕竟探针价格高，用普通pcr优化好扩增条件

谢谢你的回复啊
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三人行必有我师
8楼2010-08-28 14:08:39
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伊依雪儿

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
建议用2-△△t法来测定相对基因表达差异来做，我们实验室都是这么做了，也比较受认可
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9楼2012-12-18 17:49:56
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