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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 荧光定量PCR实验技术
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2011210200

金虫 (小有名气)

[交流] 荧光定量PCR实验技术

最近导师叫学一下荧光定量PCR技术，自己看了一些文献，知道了荧光定量PCR是通过DNA质粒配成不同标准浓度的DNA标准求出标准曲线，由于循环数与阈值Ct值和起始模板数成反比，而求出DNA的数量。由于本人不是学分子生物学和微生物学的，有几个问题想像做过荧光定量PCR的大侠交流一下：
1、荧光定量PCR的仪器是否只需要荧光定量PCR仪、电脑和专业的软件？
2、荧光定量PCR的标准DNA浓度要怎么配制？所需的DNA质粒是不是需要买？
3、荧光定量PCR的成本又多高？我做土壤的总DNA，想问一个样的成本是多少？
4、有没有专业的系统的介绍荧光定量PCR的书籍或是资料？还请各位大侠教我。
5、看了一些文献，现在荧光定量PCR大多是用于研究病原菌，想问问目前是否可以用这一技术研究土壤中有益的微生物？
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1楼 2012-06-22 09:43:24
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回帖置顶 ( 共有1个 )

371522029

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
2011210200(金币+1): 谢谢参与
zhang8826857: 金币+5, 欢迎来微生物板块交流^_^ 2012-06-22 13:15:37
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 条理很清楚啊，鼓励正解解答问题 2012-06-22 13:40:10
1、荧光定量PCR的仪器是否只需要荧光定量PCR仪、电脑和专业的软件？
荧光pcr当然是需要荧光pcr仪器的，一般价格在40万左右。半酣电脑，软件，引物设计软件。
2、荧光定量PCR的标准DNA浓度要怎么配制？所需的DNA质粒是不是需要买？
如果你能知道你所提取的基因是说少ng 就不用买了。
3、荧光定量PCR的成本又多高？我做土壤的总DNA，想问一个样的成本是多少？
做一次荧光PCR成本大概是普通的3倍吧，顺利的话。主要是荧光染料的价格。仪器损耗不做考虑。
4、有没有专业的系统的介绍荧光定量PCR的书籍或是资料？还请各位大侠教我。
书肯定是有的。小木虫就能找到不少，你输入RTpcr 就有很多
5、看了一些文献，现在荧光定量PCR大多是用于研究病原菌，想问问目前是否可以用这一技术研究土壤中有益的微生物？
可以的。荧光PCR和普通PCR差不多，就是能定量检测扩增效率，底物浓度等。不过不利于PCR产物回收用于接下来的实验。
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9楼2012-06-22 12:22:03
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2011210200

金虫 (小有名气)
晕，都啥意思嘛？欺负人家不懂啊 给我扫扫盲好吗？
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7楼2012-06-22 10:20:39
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jimjohntall

金虫 (著名写手)
★
2011210200(金币+1): 谢谢参与
荧光定量PCR：可以相对定量，也可以绝对定量。如果你做的是原核生物好像不需要标准DNA。荧光定量PCR仪包含电脑，软件的都是专用的。
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8楼2012-06-22 10:47:32
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孙启亮

金虫 (著名写手)
★
2011210200(金币+1): 谢谢参与
楼主作为初学者，提的问题很好。但是正如楼上所说，荧光定量有绝对与相对之分，相对定量不需要质粒什么的。建议楼主看技术不要看文献，直接看仪器说明书，同时要搞清楚自己的实验到底是需要绝对定量还是相对定量
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10楼2012-06-22 16:56:53
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evebobo

铜虫 (小有名气)
★
2011210200(金币+1): 谢谢参与
我做的时候 标准品（也是样品而已）和样品的曲线不一样是怎么回事啊  谁能帮忙解释下？
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11楼2012-06-22 18:24:42
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2011210200

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 371522029 at 2012-06-22 12:22:03
1、荧光定量PCR的仪器是否只需要荧光定量PCR仪、电脑和专业的软件？
荧光pcr当然是需要荧光pcr仪器的，一般价格在40万左右。半酣电脑，软件，引物设计软件。
2、荧光定量PCR的标准DNA浓度要怎么配制？所需的DNA质 ...

谢谢啊，让我明白了不少。还想问这位大哥，荧光PCR的标准DNA质粒是不是需要根据需要检测的基因而选取？需要考虑哪些因素？
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13楼2012-06-28 23:10:38
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sdsuny

铜虫 (初入文坛)
我也学习
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14楼2013-04-15 16:03:12
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我很快乐3A87

新虫 (小有名气)
我也要做荧光定量，是做虫的，你是只有你一个人做吗，有师兄师姐对这方面有涉及吗，专业仪器设备有吗
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15楼2013-04-15 16:34:22
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ice-bamboo

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by yuanyeguhong at 2012-06-22 10:02:07

这是怎么一回是啊 ？
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16楼2013-04-24 11:03:47
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yuanyeguhong2楼
2012-06-22 10:02   回复  
2011210200(金币+1): 谢谢参与
dld1233楼
2012-06-22 10:02   回复  
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goingabroad4楼
2012-06-22 10:09   回复  
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liutaobjhy5楼
2012-06-22 10:15   回复  
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huiquan09186楼
2012-06-22 10:16   回复  
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hisensecao12楼
2012-06-24 12:04   回复  
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