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2011210200

金虫 (小有名气)


[交流] 荧光定量PCR实验技术

最近导师叫学一下荧光定量PCR技术,自己看了一些文献,知道了荧光定量PCR是通过DNA质粒配成不同标准浓度的DNA标准求出标准曲线,由于循环数与阈值Ct值和起始模板数成反比,而求出DNA的数量。由于本人不是学分子生物学和微生物学的,有几个问题想像做过荧光定量PCR的大侠交流一下:
1、荧光定量PCR的仪器是否只需要荧光定量PCR仪、电脑和专业的软件?
2、荧光定量PCR的标准DNA浓度要怎么配制?所需的DNA质粒是不是需要买?
3、荧光定量PCR的成本又多高?我做土壤的总DNA,想问一个样的成本是多少?
4、有没有专业的系统的介绍荧光定量PCR的书籍或是资料?还请各位大侠教我。
5、看了一些文献,现在荧光定量PCR大多是用于研究病原菌,想问问目前是否可以用这一技术研究土壤中有益的微生物?
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371522029

金虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
2011210200(金币+1): 谢谢参与
zhang8826857: 金币+5, 欢迎来微生物板块交流^_^ 2012-06-22 13:15:37
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 条理很清楚啊,鼓励正解解答问题 2012-06-22 13:40:10
1、荧光定量PCR的仪器是否只需要荧光定量PCR仪、电脑和专业的软件?
荧光pcr当然是需要荧光pcr仪器的,一般价格在40万左右。半酣电脑,软件,引物设计软件。
2、荧光定量PCR的标准DNA浓度要怎么配制?所需的DNA质粒是不是需要买?
如果你能知道你所提取的基因是说少ng 就不用买了。
3、荧光定量PCR的成本又多高?我做土壤的总DNA,想问一个样的成本是多少?
做一次荧光PCR成本大概是普通的3倍吧,顺利的话。主要是荧光染料的价格。仪器损耗不做考虑。
4、有没有专业的系统的介绍荧光定量PCR的书籍或是资料?还请各位大侠教我。
书肯定是有的。小木虫就能找到不少,你输入RTpcr 就有很多
5、看了一些文献,现在荧光定量PCR大多是用于研究病原菌,想问问目前是否可以用这一技术研究土壤中有益的微生物?
可以的。荧光PCR和普通PCR差不多,就是能定量检测扩增效率,底物浓度等。不过不利于PCR产物回收用于接下来的实验。
9楼2012-06-22 12:22:03
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2011210200

金虫 (小有名气)


晕,都啥意思嘛?欺负人家不懂啊 给我扫扫盲好吗?
7楼2012-06-22 10:20:39
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jimjohntall

金虫 (著名写手)



2011210200(金币+1): 谢谢参与
荧光定量PCR:可以相对定量,也可以绝对定量。如果你做的是原核生物好像不需要标准DNA。荧光定量PCR仪包含电脑,软件的都是专用的。
8楼2012-06-22 10:47:32
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2011210200(金币+1): 谢谢参与
楼主作为初学者,提的问题很好。但是正如楼上所说,荧光定量有绝对与相对之分,相对定量不需要质粒什么的。建议楼主看技术不要看文献,直接看仪器说明书,同时要搞清楚自己的实验到底是需要绝对定量还是相对定量
10楼2012-06-22 16:56:53
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evebobo

铜虫 (小有名气)



2011210200(金币+1): 谢谢参与
我做的时候 标准品(也是样品而已)和样品的曲线不一样是怎么回事啊  谁能帮忙解释下?
11楼2012-06-22 18:24:42
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2011210200

金虫 (小有名气)


引用回帖:
9楼: Originally posted by 371522029 at 2012-06-22 12:22:03
1、荧光定量PCR的仪器是否只需要荧光定量PCR仪、电脑和专业的软件?
荧光pcr当然是需要荧光pcr仪器的,一般价格在40万左右。半酣电脑,软件,引物设计软件。
2、荧光定量PCR的标准DNA浓度要怎么配制?所需的DNA质 ...

谢谢啊,让我明白了不少。还想问这位大哥,荧光PCR的标准DNA质粒是不是需要根据需要检测的基因而选取?需要考虑哪些因素?
13楼2012-06-28 23:10:38
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sdsuny

铜虫 (初入文坛)


我也学习
14楼2013-04-15 16:03:12
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我很快乐3A87

新虫 (小有名气)


我也要做荧光定量,是做虫的,你是只有你一个人做吗,有师兄师姐对这方面有涉及吗,专业仪器设备有吗
15楼2013-04-15 16:34:22
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ice-bamboo

木虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by yuanyeguhong at 2012-06-22 10:02:07

这是怎么一回是啊 ?
16楼2013-04-24 11:03:47
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简单回复
2012-06-22 10:02   回复  
2011210200(金币+1): 谢谢参与
dld1233楼
2012-06-22 10:02   回复  
2011210200(金币+1): 谢谢参与
2012-06-22 10:09   回复  
2011210200(金币+1): 谢谢参与
2012-06-22 10:15   回复  
2011210200(金币+1): 谢谢参与
2012-06-22 10:16   回复  
2011210200(金币+1): 谢谢参与
hisensecao12楼
2012-06-24 12:04   回复  
2011210200(金币+1): 谢谢参与
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