24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (4197)
>虫友互识 (354)
>文献求助 (297)
>导师招生 (162)
>招聘信息布告栏 (134)
>休闲灌水 (126)
>硕博家园 (91)
>基金申请 (77)
>考博 (69)
>论文道贺祈福 (61)
>论文投稿 (61)
>考研 (59)
>博后之家 (50)
>海外博后 (44)
>教师之家 (37)
>找工作 (33)

返回列表

梦飞zhu

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2.5
帖子: 13
在线: 8.1小时
虫号: 1558797
注册: 2012-01-01
性别: GG
专业: 果树学

[求助] 荧光定量PCR ，条件优化

给位大侠，我想问一下：
1、荧光定量PCR ，条件具体怎么优化，我具体从引物浓度、退火温度进行优化。
是不是优化一个条件就需要做一次荧光定量（比如对荧光定量PCR体系中的引物浓度进行优化，分别做50、300、600、900 nm、1、10、20、30 μm引物浓度的优化组合），还是一次荧光定量就可以把所有的优化条件都解决了，进行比较啊。
2、标准曲线的绘制，一般用什么标准品，稀释浓度确定用分光光度计测定吗？
新手，求助。

回复此楼

» 猜你喜欢

金色抗生素单硫酸卡那霉素的物化性质、制备与前景已经有0人回复
解密度鲁特韦——新一代HIV整合酶抑制剂的化学、药理与产业化图景已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有134人回复
左炔诺孕酮从沃氏氧化物到炔基化反应的工艺迭代与靶点解析已经有0人回复
“关闭瘙痒信号”的多肽地非法林醋酸盐全解析已经有1人回复
Tosylate-DPA-714介导¹⁸F-DPA-714 PET成像的前沿进展已经有0人回复
I-BRD9: BRD9溴结构域化学探针，BET选择性>700倍已经有0人回复
莫那利珠单抗阻断NKG2A/HLA-E抑制通路 | Biochempartner 已经有0人回复
GSPT1口服分子胶降解剂MRT-2359 | Biochempartner 已经有0人回复
碳青霉烯类抗生素为何需联用西司他丁钠？ | Biochempartner 已经有0人回复
源自蕨类植物的抗炎美白活性分子去甲氧基荚果蕨素 | Biochempartner 已经有0人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

1楼 2012-07-27 17:27:47

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

chenguestc

木虫 (职业作家)

MolEPI: 7
应助: 576 (博士)
贵宾: 0.4
金币: 4526.9
散金: 1639
红花: 176
帖子: 4708
在线: 353.5小时
虫号: 1337860
注册: 2011-07-05
性别: GG
专业: 作物分子育种

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-30 13:44:47

是的，qPCR不像普通PCR那样可以做梯度，调整一个条件就需要做一次。
我们常用到的qPCR supplies 及用量（1个反应，20ul体系）如下，楼主可根据这个用量适量调整：
TBSYBRmix                10 ul
PrimerF (10uM)          0.6 ul
PrimerFR (10uM)       0.6 ul
cDNA (20ng/ul)          2 ul
Reference dye          0.4 ul
ddH2O                      6.4 ul