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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助交流 荧光定量PCR基线偏下
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zhangzhuang

银虫 (初入文坛)

[交流] 求助交流 荧光定量PCR基线偏下已有4人参与

荧光定量PCR荧光扩增曲线的基线偏上，导致体现不出指数增长区，新手寻求原因，用的探针他卡拉的 5’-(FAM)                  (Eclipse)-3’。    ABI的机器

图见下表：


[ Last edited by zhangzhuang on 2010-7-21 at 13:20 ]
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1楼2010-07-21 11:33:02
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steamsn

金虫 (小有名气)
zhangzhuang(金币+1):用的是他卡拉的MIX混液， 2010-07-21 16:15:19
你用的试剂盒是ABI的吗?ABI的机器作的荧光曲线本来就不是十分明显,另外你可以增大一些镁离子的浓度试试.
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我命由我不由天
2楼2010-07-21 15:00:05
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steamsn

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
scelab(金币+3):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-07-21 23:46:54
zhangzhuang(金币+1): 2010-07-22 09:40:56
引用回帖:
Originally posted by steamsn at 2010-07-21 15:00:05:
你用的试剂盒是ABI的吗?ABI的机器作的荧光曲线本来就不是十分明显,另外你可以增大一些镁离子的浓度试试.

如果有条件的话,最好使用ABI的试剂盒,因为Takara与ABI的Mix差别很大.你重新试下,调整镁离子浓度(能够提高酶活性),我以前做得时候也会碰到这种问题,ABI的机器应该有自动校正的试剂盒,你可以进行以下背景校正.还有你的探针退火温度合适不?
咱们可以探讨交流一下.
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我命由我不由天
3楼2010-07-21 22:10:37
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
★
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-07-21 23:47:05
建议你优化一下PCR参数，不仅仅包括TM，还有你的模板与引物的浓度
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4楼2010-07-21 23:15:32
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winscavin

木虫 (正式写手)
你加校正了还是没有加 是不是选择的参数和实际测定卜同
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5楼2010-07-22 00:05:54
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love_st

金虫 (著名写手)
把图形转化成线性的看下啊
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6楼2010-07-22 09:28:02
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