24小时热门版块排行榜    

查看: 4604  |  回复: 5

lianyi1989

金虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】荧光定量pcr出现直线扩增曲线,求指导

最近做的一些列样品中有的样品出现来直线扩怎曲线的现象,不知什么原因,用的SYBR Green的方法,ABI7500仪器。因为其他的样品都没这种问题,所以一开始怀疑cDNA有问题,重新合成了,但是在做仍有这种问题,真是不知道什么原因,求各位同学们给些指导,谢谢大家啦
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
lianyi1989(金币+1): 2011-01-01 12:59:47
重新设计引物,可能出现了非特异或者竞争性的东西
2楼2010-12-30 22:24:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lianyi1989

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-30 22:24:42:
重新设计引物,可能出现了非特异或者竞争性的东西

谢谢,但是我其他处理的样品没有这种问题啊,并且我用过两个引物做都是这种结果,所以我觉得是引物原因的可能性是不是比较小些?
3楼2011-01-01 13:01:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
引用回帖:
Originally posted by lianyi1989 at 2011-01-01 13:01:30:


谢谢,但是我其他处理的样品没有这种问题啊,并且我用过两个引物做都是这种结果,所以我觉得是引物原因的可能性是不是比较小些?

我最近在用qPCR检测RNAi的效果
发现如果引物没设计好,然后模板量很低的话,扩出来的曲线就是很奇怪的

还真不是单一因素引起的
4楼2011-01-01 13:03:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wmjqy

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也是用7500做的。从你的图像看,你这个根本cDNA模版就没有开链。这个可以有很多因素造成:1、退火温度和退火时间不恰当;2、可能根本就没有cDNA模版。如果是没有模版的话,那可能是你逆转录的问题了。在逆转录操作过程中RNA已经降解,或者DNA污染或者蛋白污染等情况都有可能导致逆转录失败,从而没有cDNA的合成。你逆转录之前有没有测量A260/A280,A230/A280比值是多少?如果以上都排除了,那就是你的源头 引物有问题了。得重新设计引物了。这是我用7500做的一个扩增曲线图。仅供参考
[

[ Last edited by wmjqy on 2012-5-23 at 23:10 ]
5楼2012-05-23 22:52:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yucuiyuan00

金虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
请问楼主你的这个问题解决了吗?我最近做Q-PCR也遇到了类似的问题,扩增曲线也近似直线,所以过来请教下,O(∩_∩)O谢谢
6楼2012-10-24 14:10:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lianyi1989 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +14 爱看书的可乐 2026-08-26 16/800 2026-08-26 16:47 by skyjudy
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 我不理解! +8 Edward_pc 2026-08-26 13/650 2026-08-26 15:37 by Tide man
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +6 process2012 2026-08-23 9/450 2026-08-26 15:33 by process2012
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +22 羊腰板 2026-08-21 25/1250 2026-08-26 15:00 by zuocuiping
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +4 yuleib84 2026-08-26 5/250 2026-08-26 13:40 by yuleib84
[基金申请] 科研孤儿太难了 +21 我4大白菜 2026-08-20 22/1100 2026-08-26 11:29 by nlgza
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +4 叶九微 2026-08-26 4/200 2026-08-26 10:52 by xiacongxu
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
信息提示
请填处理意见