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【求助/交流】荧光定量pcr出现直线扩增曲线，求指导
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最近做的一些列样品中有的样品出现来直线扩怎曲线的现象，不知什么原因，用的SYBR Green的方法，ABI7500仪器。因为其他的样品都没这种问题，所以一开始怀疑cDNA有问题，重新合成了，但是在做仍有这种问题，真是不知道什么原因，求各位同学们给些指导，谢谢大家啦 |
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3楼2011-01-01 13:01:30
4楼2011-01-01 13:03:30
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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我也是用7500做的。从你的图像看，你这个根本cDNA模版就没有开链。这个可以有很多因素造成：1、退火温度和退火时间不恰当；2、可能根本就没有cDNA模版。如果是没有模版的话，那可能是你逆转录的问题了。在逆转录操作过程中RNA已经降解，或者DNA污染或者蛋白污染等情况都有可能导致逆转录失败，从而没有cDNA的合成。你逆转录之前有没有测量A260/A280，A230/A280比值是多少?如果以上都排除了，那就是你的源头 引物有问题了。得重新设计引物了。这是我用7500做的一个扩增曲线图。仅供参考 [  [ Last edited by wmjqy on 2012-5-23 at 23:10 ] |
5楼2012-05-23 22:52:17
6楼2012-10-24 14:10:19
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